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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 4:27 min. • April 30th, 2023
Gli organoidi prostatici costituiscono principalmente uno strato esterno di cellule epiteliali basali e strati interni di cellule epiteliali luminali disposte attorno a un lume centrale.
L'imaging a montaggio intero consente lo studio di organoidi 3D intatti mantenendone la morfologia e l'eterogeneità. Per iniziare la colorazione, trattare gli organoidi con un fissativo adatto per bloccare i loro componenti cellulari in posizione, preservandoli. Lavare il campione per rimuovere i fissativi in eccesso.
Incubare con un cocktail di soluzione bloccante e colorante per la colorazione del DNA. Le proteine nella soluzione bloccante si legano passivamente a siti non specifici delle cellule e riducono qualsiasi colorazione di fondo. Allo stesso tempo, il colorante che colora il DNA colora i nuclei delle cellule.
Aggiungere due serie di anticorpi primari mirati ad antigeni specifici espressi dalle due popolazioni cellulari costituenti. Incubare con due diversi anticorpi secondari coniugati con colorante fluorescente che si legano agli anticorpi primari. Lavare il campione per rimuovere eventuali anticorpi non legati.
Immergere gli organoidi colorati in sequenza in concentrazioni crescenti di
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