Screening della morte cellulare mediante colorazione DAPI: un metodo per lo screening rapido della morte cellulare clonogenica indotta da IR in linee cellulari cancerose

L'esposizione a radiazioni ionizzanti come i raggi X può causare danni al DNA, portando infine alla morte cellulare. Per esaminare l'effetto delle radiazioni ionizzanti sui profili di morte cellulare, iniziare prendendo una piastra di coltura contenente cellule tumorali aderenti posizionate sulla superficie di un vetrino coprioggetti.

Irradiare la piastra di coltura con raggi X per la durata desiderata. Questo trattamento provoca danni al DNA all'interno delle cellule. Quindi, aspirare il terreno esaurito dal piatto di coltura e aggiungere un fissativo adatto. Questa soluzione permea le cellule e blocca i componenti cellulari in posizione durante le successive fasi di colorazione.

Scartare la soluzione fissativa. Rimuovere il vetrino coprioggetti contenente le cellule trattate con raggi X dal piatto di coltura. Capovolgere il vetrino coprioggetti e posizionarlo sulla superficie di un vetrino con sopra una goccia di colorante DAPI in modo che le cellule siano a diretto contatto con il DAPI.

Le molecole DAPI entrano nei nuclei e si legano ai siti ricchi di A e T del DNA. Ora, visualizza le cellule sotto un microscopio a fluorescenza. I nuclei appaiono blu e mostrano morfologie distin