Quantificazione basata su nanoparticelle coniugate con anticorpi mediante microscopia a campo scuro: una procedura per catturare e quantificare esosomi specifici dai fluidi corporei

Gli esosomi sono piccole strutture racchiuse nella membrana che vengono secrete dalle cellule nello spazio extracellulare. Gli esosomi sono abbondantemente presenti nei biofluidi.

Per identificare e catturare esosomi specifici dai fluidi corporei, iniziare prelevando un vetrino immunologico a più pozzetti. Questo vetrino è funzionalizzato con proteine che agiscono come antigeni e si legano ad anticorpi specifici.

Integrare il vetrino con la soluzione di anticorpi primari desiderata e incubare. Questi anticorpi si legano agli antigeni pre-rivestiti sulla superficie del vetrino.

Aspirare la soluzione rimanente per rimuovere eventuali anticorpi non legati. Ora, aggiungi un tampone bloccante che blocca gli antigeni liberi, impedendo così il legame aspecifico degli esosomi.

Quindi, rimuovere il tampone bloccante, caricare gli esosomi contenenti la sospensione di siero sul vetrino e incubare. Ciò consente il legame esclusivo di esosomi specifici del bersaglio agli anticorpi primari catturati.

Quindi, caricare una sospensione di anticorpi secondari coniugati con nanoparticelle d'oro sulla superficie del vetrino. Questi anticorpi si attaccano agli esosomi pre-legati e formano un complesso