Cromatografia liquida ad alte prestazioni in fase inversa: un metodo robusto per la quantificazione di acidi sialici marcati in fluorescenza e derivatizzati isolati dal fegato di topo

Gli acidi sialici, come l'acido N-acetilneuraminico e l'acido N-glicolilneuraminico, sono frazioni di carboidrati caricate negativamente che si trovano alle estremità distali delle catene oligosaccaridiche sulla superficie cellulare dei mammiferi.

Per quantificare le quantità relative di questi acidi sialici nel tessuto epatico di topo utilizzando la cromatografia liquida ad alte prestazioni in fase inversa o RP-HPLC, trattare innanzitutto la miscela di acido sialico isolata con un agente di derivatizzazione. L'agente di derivatizzazione interagisce con i gruppi funzionali degli acidi sialici, generando derivati stabili e fluorescenti dell'acido sialico.

Assemblare una colonna RP-HPLC, collegata a un rivelatore a fluorescenza. La colonna è costituita da una fase stazionaria porosa a base di silice legata a leganti a catena alchilica idrofobica non polari per facilitare le interazioni selettive con i derivati dell'acido sialico durante il ciclo cromatografico.

Equilibrare la colonna utilizzando la fase mobile polare acquosa contenente basse concentrazioni di acetonitrile, un solvente organico meno polare, per un condizionamento ottimale della colonna.

Caricare la miscela di acido si