JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:39 min. • July 8th, 2025
La miosina, una proteina motrice, ha un dominio globulare della testa che interagisce con l'actina, una proteina filamentosa. Questa interazione è essenziale per la traslocazione della miosina lungo i filamenti di actina. Per studiare questo legame in vitro, eseguire un saggio di motilità invertita della miosina su actina legata alla superficie.
Per iniziare, assemblare una camera di saggio posizionando un vetrino coprioggetti rivestito di glicole polietilenico biotinilato su un vetrino da microscopio in modo che la superficie rivestita sia rivolta verso l'interno, creando la parte superiore della camera.
Passare una soluzione contenente avidina, una glicoproteina, attraverso la camera. L'avidina si lega alla biotina con elevata affinità, che migliora l'adesione dell'actina. Successivamente, fluire in filamenti di actina marcati con biotina marcati con un fluoroforo rosso. Il ligando della biotina si lega all'avidina, immobilizzando i filamenti sulla superficie del vetrino.
Infine, aggiungi le proteine della miosina 5A marcate con proteine fluorescenti verdi in un tampone contenente molecole di adenosina trifosfato, o ATP. La miosina 5A a doppia testa, contenente una testa posterio
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