JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 5:13 min. • July 8th, 2025
Per rilevare le interazioni ligando-analita utilizzando l'interferometria a biostrato, BLI, iniziare con un biosensore a fibre ottiche idratate fissato su un supporto per strumento BLI, impostato sul programma desiderato.
La punta del biosensore è rivestita con uno strato biocompatibile immobilizzato con gruppi di acido nichel-nitrilotriacetico, Ni-NTA. Immergere la punta del biosensore nel tampone.
Lo strumento emette luce bianca verso il biosensore, che viene riflessa da due interfacce: lo strato di riferimento interno o ottico e lo strato biocompatibile. I raggi riflessi interferiscono in modo costruttivo o distruttivo a diverse lunghezze d'onda della luce. Un fotorilevatore rileva il modello di interferenza risultante.
Dopo la misurazione della risposta interferometrica al basale, aggiungere una soluzione di ligando marcata con istidina. I tag di istidina si legano ai cationi di nichel sul biosensore, immobilizzando i ligandi sulla punta.
Dopo l'associazione, la luce bianca emessa viene riflessa dallo strato ottico e lo strato biocompatibile immobilizzato con ligandi con spessore ottico maggiore sulla punta. Ciò aumenta la distanza tra gli strati riflettenti, causando uno spost
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