Induzione dell'enterocolite necrotizzante in un modello enteroide epiteliale umano
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
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Ottenere cripte derivate dal tessuto intestinale tenue umano: invaginazioni tubulari contenenti cellule staminali e vari tipi di cellule epiteliali.
Aggiungi le cripte intestinali in una matrice seminterrato raffreddata.
Trasferire questa miscela in una piastra multipozzetto, creando una cupola tridimensionale.
Aggiungere il terreno di coltura e incubare.
Le cellule staminali si auto-organizzano, proliferano e si differenziano in più tipi di cellule intestinali, formando enterosfere.
Nel corso del tempo, le enterosfere maturano in enteroidi, strutture tridimensionali che si autorinnovano, simili alle cripte intestinali.
Aggiungere lipopolisaccaridi, o LPS, un'endotossina batterica, nel pozzetto contenente enteroidi e incubare.
Le molecole di LPS si legano al recettore toll-like nell'enteroide, avviando una risposta pro-infiammatoria, con conseguente accumulo di specie reattive dell'ossigeno. Questo innesca una cascata di eventi che portano all'apoptosi.
Di conseguenza, l'integrità dell'enteroide è compromessa, portando alla penetrazione di LPS nel lume, intensificando ulteriormente la risposta infiammatoria.
Questo imita lo sviluppo dell'enterocolite necrotizzante, una grave infiam
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