Un test immunologico multiplex basato su microsfere per quantificare più bersagli di citochine

Prendi una piastra multipozzetto con filtri alla base.

Aggiungere un campione di prova contenente diverse citochine.

Aggiungere diversi set di microsfere differenziate per dimensione e intensità di fluorescenza interna.

Ogni set è coniugato a un anticorpo che ha come bersaglio una specifica citochina.

Incubare la piastra al buio sotto agitazione.

Gli anticorpi si legano alle loro citochine bersaglio, immobilizzandole sulle microsfere.

Applicare un vuoto per rimuovere le citochine non legate. Le citochine legate alle microsfere vengono mantenute a causa della dimensione più piccola dei pori della membrana.

Aggiungere un cocktail di anticorpi di rilevamento coniugati con biotina che si legano alle citochine legate alla microsfera.

Aggiungere una streptavidina fluorescente coniugata con reporter e incubare al buio sotto agitazione. La streptavidina si lega alla biotina, immobilizzando il reporter sul complesso di microsfere.

Rimuovere le molecole non legate e risospendere le microsfere.

Utilizzando la citometria a flusso, identificare le citochine legate determinando le dimensioni e la fluorescenza interna delle microsfere.

Per determinare la quantità di una citochina specifica, misur