Analisi basata sulla citometria a flusso dell'attivazione delle cellule dendritiche mediante immunocomplessi
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:35 min. • July 8th, 2025
Inizia con una sospensione di cellule tumorali fissata chimicamente.
Aggiungere una concentrazione ottimale di immunoglobulina G legante il tumore che si lega agli antigeni della superficie delle cellule tumorali, formando complessi immunitari o IC.
Trasferire gli IC in una piastra di coltura contenente cellule dendritiche aderenti. Incubare.
La cellula dendritica riconosce l'IC, lo interiorizza e lo elabora in frammenti peptidici.
I frammenti vengono caricati su molecole del complesso maggiore di istocompatibilità di classe II o MHC-II e presentati sulla superficie cellulare, insieme alla molecola costimolatoria CD86.
Rimuovi i supporti. Aggiungere un tampone di dissociazione cellulare e pipettare energicamente per staccare le cellule.
Trasferire le cellule in una provetta.
Centrifugare e risospendere le cellule in una soluzione bloccante per bloccare le interazioni non specifiche.
Sovrapposizione con un cocktail di anticorpi marcati con fluoroforo mirati a MHC-II e CD86.
Aggiungere un colorante legante il DNA e incubare brevemente per colorare i nuclei delle cellule morte.
Utilizzando la citometria a flusso, identificare le cellule vive che co-esprimono MHC-II e CD86, confermando
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