Generazione di un vaccino multivalente con vescicole della membrana esterna

Prendiamo i poliplessi di trasfezione contenenti plasmidi bersaglio legati a un polimero. I plasmidi codificano un antigene virale fuso con un tag peptidico e un tag di affinità.

Incubare i poliplessi con cellule di mammifero, che internalizzano i poliplessi all'interno degli endosomi.

Il polimero induce la rottura delle vescicole. I plasmidi rilasciati esprimono l'antigene virale, che viene secreto extracellulare.

Raccogliere il surnatante contenente l'antigene e i contaminanti. Aggiungere un agente concorrente a bassa concentrazione.

Caricarlo su una colonna per cromatografia di affinità.

I tag di affinità si legano alla resina della colonna, immobilizzando l'antigene, mentre l'agente concorrente diminuisce il legame non specifico.

Far fluire l'agente concorrente a bassa concentrazione, rimuovendo i contaminanti debolmente legati.

Lavare con concentrazioni crescenti di agenti concorrenti per spostare gli antigeni fortemente legati, eluendoli.

Introdurre vescicole batteriche della membrana esterna, o OMV, con una proteina catturante legata alla superficie e incubare.

I tag dei peptidi antigenici si legano alle proteine catturanti, formando un vaccino OMV con un display di antigene