Registrazione del potenziale di campo locale in fette di corteccia ippocampale-entorinale di topo

Fissare una fetta di corteccia ippocampale-entorinale di topo in una camera di registrazione sommersa.

ACSF ossigenato a flusso continuo a temperatura costante per mantenere la vitalità dei tessuti.

Posizionare una pipetta di stimolazione riempita con una soluzione elettrolitica all'interno dello strato radio della regione CA3 dell'ippocampo, contenente i neuroni che ricevono informazioni dalla corteccia entorinale.

Inserire una pipetta di registrazione riempita di ACSF nello strato piramidale della regione CA1, costituita da neuroni che formano sinapsi con proiezioni assonali dal CA3.

Utilizzando la pipetta di stimolazione, applicare un impulso elettrico per innescare i potenziali d'azione nei neuroni CA3 presinaptici.

Il potenziale d'azione induce il rilascio di neurotrasmettitori, che si legano ai recettori sui neuroni CA1 postsinaptici. Il legame induce l'afflusso di ioni, portando a un cambiamento nel potenziale di membrana.

I cambiamenti combinati nel potenziale di membrana di più neuroni CA1 postsinaptici, denominati potenziale di campo locale o LFP, vengono registrati extracellulare dalla pipetta di registrazione.

Per registrare i potenziali di campo locali, riempire un becher da 400 millilitri con ACSF a bolle di carbogeno e posizionare un'estremità del tubo della pompa nel becher. Accendere una pompa peristaltica a una velocità compresa tra 8 e 10 millilitri al minuto, per dirigere l'ACSF dal becher da 400 millilitri a un serbatoio riscaldato e dal serbatoio alla camera di registrazione a 32 gradi Celsius.

Quindi, bloccare brevemente il tubo e spegnere la pompa per mettere in pausa il flusso. Usando una pinza sottile, trasferire una fetta di tessuto cerebrale nella camera di registrazione vicino all'angolo della carta per lenti su cui è appoggiato il tessuto, tagliarla verso il basso. Staccare la carta per lenti, lasciando la fetta immersa nella camera di registrazione, e utilizzare un'arpa per fissare la fetta.

Utilizzando un micromanipolatore manuale, far avanzare lentamente la punta di una pipetta di stimolazione riempita di cloruro di sodio sulla superficie della fetta con un angolo di 30-45 gradi. Quindi, utilizzare un secondo micromanipolatore per far avanzare lentamente la punta di una pipetta di potenziale di campo locale riempita di ACSF nella regione di interesse con un angolo di 30-45 gradi e registrare il potenziale di campo locale del campione secondo i protocolli standard.