Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

Iniziare iniettando per via sottocutanea un'emulsione contenente un peptide neuronale e un adiuvante batterico ucciso dal calore in un topo anestetizzato.

Nel tessuto sottocutaneo, l'adiuvante attrae le cellule presentanti l'antigene, o APC, che elaborano e presentano i peptidi neuronali sui principali complessi di istocompatibilità.

Le APC attivate raggiungono i linfonodi e interagiscono con le cellule T naive, inducendo la loro differenziazione in cellule T autoreattive.

Queste cellule T circolano e raggiungono la barriera emato-encefalica o BEE.

Successivamente, iniettare intraperitonealmente esotossine derivate da batteri.

Le esotossine raggiungono la BEE, aumentandone la permeabilità e consentendo l'infiltrazione delle cellule T nel sistema nervoso centrale (SNC).

Nel SNC, le cellule T interagiscono con le APC residenti che presentano il peptide neuronale, promuovendo il rilascio di citochine che induce un'ulteriore infiltrazione delle cellule immunitarie.

Le cellule immunitarie rilasciano citochine pro-infiammatorie, causando danni alla mielina.

Inoltre, le cellule B interagiscono con le cellule T e secernono autoanticorpi che danneggiano ulteriormente la mielina, stabilendo l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE).

In questa procedura, sciogliere PTX a 2 microgrammi per millilitro in 1x PBS e mescolare bene. Quindi, iniettare 100 microlitri di PLP/CFA nei topi per via sottocutanea, due volte alla base della coda durante una breve anestesia con isoflurano. Non iniettare nella parte posteriore del collo, perché qualsiasi reazione immunitaria nella parte superiore della schiena o nel collo disturberà l'imaging della testa e del midollo spinale.

Una o due ore dopo l'immunizzazione, iniettare 100 microlitri di PTX nei topi per via intraperitoneale.

Quindi, 24 ore dopo l'immunizzazione, iniettare nuovamente nei topi 100 microlitri di PTX. Per i topi di controllo, iniettare due volte 100 microlitri di CFA senza PLP, alla base della coda.