Analisi delle strutture amiloidi in una sezione di tessuto mediante microscopia a fluorescenza con imaging a vita

Prendi una sezione di tessuto con aggregati amiloidi che rappresentano depositi proteici anomali.

Il tessuto è colorato con il colorante fluorescente eptamero-formil tiofene acido acetico o hFTAA, che si lega specificamente alle strutture beta-sheet delle fibrille amiloidi.

Visualizzare il vetrino utilizzando un microscopio confocale dotato di un'unità di microscopia per imaging a fluorescenza, che misura il tempo di fluorescenza delle molecole di colorante.

Ottimizza le impostazioni del microscopio per un'efficace eccitazione delle molecole di colorante.

Quando la luce laser illumina il tessuto, l'hFTAA eccita e diventa fluorescente.

Un legame del colorante più forte in strutture compatte si traduce in una durata più lunga, mentre un legame del colorante più debole in strutture meno compatte porta a una durata più breve.

Successivamente, il software genera un'immagine codificata a colori dell'aggregato.

I colori, come il rosso e il giallo, appaiono nella periferia, indicando tempi di fluorescenza più brevi che riflettono strutture amiloidi meno compatte e instabili.

Mentre colori come il blu e il verde nel nucleo rappresentano tempi di fluorescenza più lunghi, riflettono strutture am