Visualizzazione della morfologia degli astrociti utilizzando la ionoforesi con colorante fluorescente in una fetta di cervello di topo fissa

Metti una fetta di cervello di topo fissata chimicamente in un piatto con fondo di vetro contenente tampone e fissala con una rete.

Collegare un elettrodo riempito con un colorante fluorescente anionico idrofilo a una sorgente di tensione.

Inserire un elettrodo di terra nel tampone per completare il circuito elettrico.

Utilizzando l'illuminazione a campo chiaro, far avanzare l'elettrodo riempito di colorante verso la fetta.

Passa all'imaging a contrasto interferenziale differenziale a infrarossi per localizzare un astrocita.

Forare il soma degli astrociti con l'elettrodo per accedere al citoplasma.

Applicare una corrente elettrica per guidare il colorante nel citoplasma tramite ionoforesi.

Passa alla microscopia confocale per monitorare il movimento del colorante.

Il colorante idrofilo, incapace di attraversare la membrana idrofoba, si diffonde all'interno del citoplasma per riempire il soma e i rami.

Una volta riempita la cella, interrompere la corrente ed estrarre l'elettrodo.

Lasciare che la membrana degli astrociti si richiuda.

Acquisisci immagini su vari piani Z e ricostruiscile per visualizzare la morfologia degli astrociti.

Per il test di iniezione del colorante, posizionare delicatam