Imaging di polisomi isolati da un cervello di topo mediante microscopia a forza atomica

0 views • 2:28 min • May 29th, 2025

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Inizia con un foglio di mica con polisomi aderenti isolati dal tessuto cerebrale del topo.

Un polisoma è un complesso di ribosomi multipli attaccati a un filamento di RNA.

Usando del nastro adesivo, fissare il foglio di mica al supporto del campione.

Posizionare il portacampione nel tavolino del microscopio a forza atomica.

Posizionare il cantilever premontato. Allineare il laser e il rivelatore per garantire un rilevamento accurato del segnale durante l'imaging.

Regolare la frequenza di oscillazione del cantilever per ottimizzare il rilevamento delle caratteristiche della superficie preservando l'integrità del campione.

Iniziare l'imaging facendo oscillare la punta a sbalzo sulla superficie del campione.

Quando la punta incontra una superficie rialzata del polisoma, il laser viene deviato.

Queste deflessioni del laser vengono catturate dal rivelatore, che genera un'immagine con risoluzione su scala nanometrica.

Utilizzare un software appropriato per correggere gli effetti arbitrari di inclinazione e deriva, consentendo la visualizzazione del polisoma.

Fissare il campione preparato al supporto del campione dell'AFM utilizzando del nastro biadesivo. Quindi, inserire il portacampione nello stadio AFM secondo le istruzioni del produttore. Dopo la calibrazione, avvicinarsi al campione fino a quando la punta a sbalzo non si innesta sulla superficie.

Selezionare un'area di scansione di 2 x 2 micron, una risoluzione di almeno 512 x 512 pixel. Scegli la modalità di sottrazione dello sfondo in tempo reale e seleziona una scala Z da 20 a 25 nanometri. Quindi, inizia l'acquisizione dell'immagine. Ispezionare l'immagine, cercando la presenza di oggetti rotondi caratterizzati da un'altezza compresa tra 10 e 15 nanometri quando si acquisiscono immagini in aria.

Quindi, regolare il set point e i parametri di feedback fino a visualizzare gli oggetti appuntiti. Lo sfondo dovrebbe apparire relativamente piatto in buoni campioni con oggetti alti da 2 a 4 nanometri. Una volta che l'immagine appare buona, acquisire diverse scansioni di 2 x 2 micron in diverse aree del campione.

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Last updated: 27 June 2026