JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:51 min. • June 17th, 2025
Inizia con una configurazione al microscopio a fluorescenza a riflessione interna totale (TIRF) con una camera di imaging coperta contenente un vetrino coprioggetti con cellule di neuroblastoma umano aderenti in un tampone.
Queste cellule esprimono fluorofori specifici delle membrane delle vescicole sinaptiche.
In modalità epifluorescenza, selezionare una cellula per l'imaging.
In modalità TIRF, attraverso l'obiettivo, dirigere un laser verso il campione, che appare come un punto sul coperchio.
Regolare l'angolo in modo da superare l'angolo critico all'interfaccia tra il vetrino coprioggetti ad alto indice di rifrazione e il campione a basso indice di rifrazione, provocando la riflessione interna totale (TIR), vista come una linea sottile.
TIR genera un'onda evanescente che eccita i fluorofori sulla membrana più vicina.
La fluorescenza emessa viene raccolta dall'obiettivo e catturata da una telecamera.
Ottimizza per ottenere un'immagine ad alto contrasto della membrana cellulare vicino al vetrino coprioggetti.
Ottimizza le impostazioni di acquisizione per ridurre al minimo il fotobleaching e impostare la frequenza di campionamento.
Inizia l'imaging TIRF per visualizzare le vescicole sinapti
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