Sviluppo di bronchiolite obliterante in un modello murino di trapianto polmonare ortotopico

L'obiettivo generale di questa procedura è stabilire un modello di bronchiolite letterale nel trapianto di polmone ortotopico speculare. Ciò si ottiene prelevando prima il polmone del donatore da un topo C 57 BL 10. Il secondo passo è preparare la cuffia per l'arteria polmonare bronca e la vena per l'anastomosi.

Successivamente, il polmone del donatore preparato viene trapiantato nel topo ricevente C cinque sette BL sei. Il passo finale consiste nell'osservare il topo trapiantato per 21 o 28 giorni dopo il trapianto. In definitiva, l'analisi istologica viene utilizzata per mostrare lesioni da bronchiolite letteraria nel polmone trapiantato.

Il vantaggio principale di questo modello rispetto al modello di trapianto eterotopico delle vie aeree speculare è che il modello attuale imita la condizione umana. Generalmente, gli individui nuovi a questo metodo avranno difficoltà perché le strutture superiori nei topi sono molto delicate e più suscettibili alle lesioni perché masse solo un decimo della massa del ratto Metti il topo donatore in una camera di detenzione sigillata e induci l'anestesia con il 5% di fluoro. Quindi, utilizzare il catetere endovenoso calibro 20 per intubare il topo o il Trae, quindi posizionarlo su un ventilatore per roditori.

Mantenere l'anestesia con l'uno al 2% di fluoro. Dopo esserti assicurato che il topo sia completamente anestetizzato dalla mancata risposta al movimento della coda e al pizzicamento delle dita, posizionalo in posizione supina e prepara l'addome con alcol al 70%. A questo punto, tagliate via la pelle sovrastante l'addome con un paio di forbici ed esponete la muscolatura addominale.

Successivamente, eseguire una sternotomia lapar praticando prima un'incisione sulla linea mediana attraverso la parete addominale, quindi tagliando trasversalmente lo sterno, allontanare l'intestino e individuare la vena cava inferiore, che si trova appena sotto il fegato. Iniettare eparina a 100 microlitri per chilogrammo nell'IVC. Quindi, tirare verso il basso il legamento falciforme del fegato e tagliare il diaframma lungo l'attacco causale ventrale verso la colonna vertebrale.

Tagliare entrambi i lati della parete toracica fino al collo per esporre la cavità toracica. Tagliare la gabbia toracica bilateralmente proteggendo il polmone e rimuovere il timo. Quindi, tagliare l'IVC intratoracico a livello del diaframma.

Ora individua il cuore e asporta l'appendice atriale destra. Quindi praticare un'incisione trasversale alla radice del tronco dell'arteria polmonare e utilizzare l'incisione per lavare i polmoni con due millilitri di anelli lattati raffreddati e 0,1 millilitri di eparina. Esporre la trachea e poi tagliarla via insieme all'esofago.

Ora arrestare la ventilazione a due terzi dell'inflazione di fine marea. Esporta il blocco lungo del cuore e conservalo sul ghiaccio. Metti una garza sul polmone asportato per proteggerlo dalla luce.

Incidere il legamento polmonare fino alla vena polmonare o pv. Rimuovere l'esofago e l'aorta per localizzare l'ilo. Trova l'arteria polmonare o pa, che si trova nella parte più cranica dell'ilo e del bronco principale collegato.

Sezionare con cura l'arteria polmonare lontano dal bronco. Ora, crea una cuffia PA da un catetere IV calibro 24 tagliandola a 0,5 millimetri di lunghezza con un'estensione di 0,7 millimetri. La superficie del bracciale è intrecciata AB.

Al fine di fornire una superficie per l'anastomosi, realizzare una cuffia per il bronco utilizzando un materiale simile alla cuffia PA utilizzando solo un catetere calibro 20 tagliato a una lunghezza di un millimetro con un'estensione di 0,7 millimetri. La dimensione del bracciale PV varia in base al peso del topo donatore. Per topi di peso compreso tra 24 e 27 grammi.

La misura del bracciale è di calibro 22 con una lunghezza di 0,7 millimetri e un'estensione di 0,7 millimetri per topi di peso compreso tra 27 e 32 grammi. Le lunghezze sono le stesse, ma viene utilizzato un catetere calibro 20. Ora, inserisci i polsini nella lente distale dell'arteria polmonare, della vena polmonare e del bronco, fissandoli ciascuno con nove punti di sutura di seta.

Dopo che i polsini sono stati tutti fissati correttamente. Avvolgere il polmone del donatore preparato in una garza imbevuta di ringer lattato e metterlo sul ghiaccio fino al trapianto. Per preparare il topo ricevente, indurre l'anestesia e porre in ventilazione meccanica nello stesso modo utilizzato per il donatore.

Radere la parete toracica sinistra e preparare con alcol al 70%. Inizia praticando un'incisione toracotomica nel terzo spazio intercostale sinistro. Estendere l'incisione dorsalmente vicino alla colonna vertebrale.

Assicurarsi che il campo chirurgico sia drappeggiato in modo sterile e posizionare un morsetto per microvasi sui vasi polmonari sinistri e sui bronchi adiacenti al cuore. L'arteria polmonare può essere visualizzata all'aspetto cranico, la vena polmonare all'estremità dell'ilo e il bronco tra di loro. Quindi, utilizzare una trazione delicata su un emostatico per causare una lieve tensione su pa, PV e bronchi.

Lasciare le strutture ilari bloccate e resecare con cura il polmone sinistro. Isolare l'arteria polmonare, la vena polmonare e il bronco, quindi posizionare una sutura oh attorno a ciascuna struttura. Sezionare completamente il PA dalla sua guaina avventiziale, quindi praticare una piccola incisione trasversale di circa un quarto della circonferenza del vaso nella parete anteriore.

Lasciando intatta la prosecuzione della parte dorsale dell'arteria, prelevare il polmone donatore, che viene avvolto in una garza di cotone imbevuta di ringer lattati a freddo, e posizionarlo nella cavità toracica. Successivamente, inserire i bracciali nel pa, PV e bronco ricevente per creare anastomosi e legarli con nano sutura. Quindi, rimuovere il polmone del ricevente.

Quindi rimuovere il morsetto a croce ilare, che consente la riperfusione e la ventilazione. Riposizionare il polmone trapiantato nel torace ricevente e chiudere l'incisione della toracotomia Utilizzando cinque suture, il topo dovrebbe ora riprendersi dall'anestesia. La buprenorfina può essere somministrata per alleviare il dolore dopo che il topo ha ripreso conoscenza.

Questa tabella mostra i punteggi istologici del rigetto acuto e della prevalenza della bronchiolite letteraria o OB. Il punteggio post-trapianto del rigetto acuto è indicato come punteggio A. Le combinazioni di allotrapianto mostrano una patologia di rigetto notevolmente più acuta o cronica rispetto all'innesto ISO. Inoltre, la prevalenza di bronchiolite letterale era significativamente più alta nelle combinazioni di allotrapianto rispetto al trapianto ISO al giorno 21 e 28 dopo il trapianto.

I risultati macro e l'istopatologia a 28 giorni dopo il trapianto di polmone sono mostrati qui. Queste immagini rappresentano i risultati macro e il polmone di innesto ISO colorato con H ed E e il polmone naïve destro. Queste immagini rappresentano l'allotrapianto polmonare BL 10 colorato con trireme h ed e masen trapiantato in un ricevente di topo BL sei, che ha sviluppato rispettivamente OB e non OB.

La freccia bianca in una B identifica le lesioni ostetriche. Questo pannello mostra l'allotrapianto polmonare BL six trapiantato nel ricevente di topo BL 10 Una volta padroneggiato. Questa tecnica può essere eseguita in quasi mezz'ora se eseguita correttamente.

L'utilità di questa tecnica è che può essere utilizzata per rispondere a domande meccanicistiche riguardanti la disfunzione primaria del trapianto, il rigetto acuto e la bronchiolite ablativa dopo il trapianto di polmone.