Di base Caenorhabditis elegans Metodi: sincronizzazione e di osservazione

In questo video, ti mostreremo come sincronizzare l'eleganza C nella fase di primo livello. Questo è un metodo semplice, ma molto comune, quindi sarà molto utile. Sei ancora un principiante.

Se sei un esperto di C, potresti trovare qui alcuni suggerimenti per ottimizzare questo protocollo. La base della sincronizzazione dei vermi si basa sulla resistenza relativa del clen e degli embrioni alla soluzione alcalina di ipoclorito adulti di coniglio. Che questi vermi adulti con molti embrioni all'interno vengano incubati con una soluzione di ipoclorito in modo che vengano uccisi e rimangano solo embrioni.

La seconda parte della sincronizzazione si ottiene per mancanza di cibo, in modo che anche se gli embrioni si ammalano in momenti diversi, non si sviluppano più lontano di quello L. Il primo passo per iniziare un protocollo di blitz è quello di avere i vermi nella fase di deposizione delle uova e lì diverse uova sparse sul piatto. Usa M nove per recuperare gli adulti al fine di raccogliere.

Inoltre, gli embrioni già in piombo sulla superficie della piastra possono essere raschiati con un materiale morbido come un pezzo di una pellicola radiografica per lavare via i batteri recuperati con diversi lavaggi M nove. Di solito ne bastano un paio. Una volta lavati i vermi, è il momento di aggiungere la soluzione sbiancante appena preparata in base alle nostre preferenze.

Controlla il tempo di incubazione mentre agiti il tubo. È possibile monitorare la generazione degli adulti sotto lo stereomicroscopio. Una volta che non è consigliabile quasi nessuna carcassa, interrompere la reazione aggiungendo M nove fino a quando il tubo non è completamente pieno.

Per completare il protocollo, eseguire almeno tre lavaggi. Con M nine le uova vengono incubate con continua esitazione durante la notte in un tampone M nine, che consente la schiusa ma impedisce l'ulteriore sviluppo dei vermi. Sebbene la sincronizzazione possa essere eseguita a qualsiasi temperatura compresa tra 15 e 25 gradi, si consiglia 15

Poiché lo sviluppo è più lento, come abbiamo accennato durante il suo sviluppo, l'elegan attraversa quattro stadi larvali prima dell'età adulta, il tempo, a seconda della temperatura a cui viene sollevato. Mentre l'elgan di tipo C tollera temperature di crescita che vanno dai 15 ai 25 gradi. Tuttavia, il tasso di crescita è più alto.

La temperatura superiore qui, puoi vedere come dopo 24 ore, le fasi in cui si trovano i vermi sono diverse. A 15 e 25 gradi dopo 48 ore a 25 gradi, osserviamo già gli embrioni. Tuttavia, dobbiamo aspettare più di 80 ore per vedere gli embrioni sulla superficie delle piastre.

Con i vermi cresciuti a 15 gradi per avere risultati ottimali, è necessario prendere in considerazione diversi problemi quando si esegue un esperimento di blitz. È anche importante riconoscere i vermi che sono la fase del desiderio per l'esecuzione dell'esperimento. Quindi ti mostreremo come distinguere gli stadi in base alle dimensioni, all'interferenza differenziale, alla microscopia a contrasto o alla colorazione.

In questo grafico, si può apprezzare il tasso di crescita dei vermi GaN, in base alla temperatura, come si dice, vengono cresciuti essendo molto più veloci a 25 gradi. Esiste una correlazione tra le dimensioni degli animali e lo sviluppo degli elementi marini. Con il software appropriato, gli animali possono essere misurati e quindi classificati nella corretta tenuta di sviluppo.

Secondo questo grafico, tuttavia, il sito è un marcatore grossolano delle fasi di sviluppo. Una messa in scena più concordata può essere ottenuta osservando parti dei mari, anatomie che possono essere utilizzate e riconosciute mediante interferenza differenziale, microscopia a contrasto o colorazione DPI. Nel nostro laboratorio, abbiamo utilizzato questo protocollo per sincronizzare i vermi per diversi esperimenti come micro uova in mono colorazione, visualizzazione in situ e colorazione up.

Inoltre, questo protocollo ti aiuta anche a sbarazzarti della contaminazione. Per migliorare il contrasto viene utilizzata la microscopia a contrasto interferenziale differenziale o nomar. In campioni trasparenti non colorati, gli animali vengono montati vivi su una base del 2%Agros agros può essere preparato in precedenza e conservato a quattro gradi quando necessario.

Può essere sciolto e mantenuto a 65 gradi. Una volta che gli agros si sono sciolti, metti del nastro adesivo su un vetrino e posizionali su entrambi i lati di un terzo vetrino. Prendi con cura degli agro e metti una goccia sullo scivolo senza nastro adesivo.

Coprite gli agros con un altro vetrino posto trasversalmente. Una volta che il percorso è solido, separare le due diapositive facendole scorrere con cautela l'una sull'altra. Il pad si attaccherà a uno di essi.

Aggiungi un po' di Amazon sul pad per mantenere i vermi immobilizzati. Raccogli alcuni vermi sotto il microscopio da dissezione e trasferiscili sulla goccia di lele. Evitare di danneggiare il percorso.

Prendi un vetrino coprioggetto e aggiungi un po' di smalto ai bordi Posiziona con cura il vetrino coprioggetti su questo vetrino prevenendo la formazione intestinale. La preparazione può essere osservata immediatamente al microscopio. Una delle caratteristiche più semplici dell'anatomia di c Elgan è l'Alva.

Ad esempio, l'aava con una forma a tre di Natale è caratteristica del quattro stadi L. Informazioni dettagliate sull'anatomia del c elgan attraverso lo sviluppo possono essere ottenute da www.orla.org. La colorazione Tapis è una procedura comune per identificare le singole cellule.

Il fissaggio con il tunnel è un metodo rapido per fissare i vermi. Per la colorazione del tappy, aggiungere prima una goccia di tampone M nine sulla superficie di un vetrino da microscopio. Raccogli alcuni vermi direttamente dal piatto e trasferiscili sulla goccia di M nove.

Eliminare l'eccesso di M nove con un tubo o con un fazzoletto molle. Aggiungi un tunnel ai vermi. Fallo di nuovo.

Una volta che la prima goccia è asciutta, aggiungere un po' di terreno di montaggio con API e oversleep prima di portare la preparazione al microscopio. Lo sviluppo del go può essere facilmente osservato in uno stent caldo con api.