Name: Trans-vivo Delayed Type Ipersensibilità Assay per Antigen regolamento specifico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Scopri l'assay trans vivo DTH per monitorare risposte immunitarie specifiche in pazienti trapiantati usando PBMC e topi SCID. Questo metodo aiuta a valutare la sicurezza della riduzione dell'immunosoppressione.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Gli autori vorrebbero riconoscere i contributi di AM VanBuskirk allo sviluppo della nostra comprensione della risposta DTH regolamentato nei destinatari del trapianto. Questo lavoro è stato supportato sovvenzioni NIH PO1AI084853 e R01AI066219-06, e dalla UE sponsorizzato uno studio.

1. Preparazione di linfociti <ol><li> Prelevare il sangue in (acido citrato destrosio) tubi di ACD. </li><li> Isolare PBMC da sangue periferico umano fresco utilizzando linfociti di separazione medio secondo metodi standard. </li><li> Lavare le PBMC tre volte con PBS per rimuovere le piastrine contaminanti. Le piastrine sono risultati interferire con test DTH trans-vivo. Massima ammissibile di contaminazione delle piastrine di preparazione PBMC è ≤ 1x10 7 / iniezione. </li><li> Se vi è una contaminazione del globulo rosso evidente, lisi dei globuli rossi utilizzando tampone di lisi ACK dopo primo lavaggio. Rimuovere il tampone ACK lavando due volte con PBS. </li></ol> 2. Preparazione di alloantigene <ol><li> Isolare PBMC dal sangue periferico del donatore utilizzando la procedura sopra riportata. </li><li> Risospendere donatore PBMC in PBS ad una concentrazione di 120x10 6 cellule / ml (4x10 6 cellule / 30 microlitri). </li><li> Aggiungere 1 mM PMSF alla miscela per impedire proteinedegradazione. </li><li> Sonicare la sospensione cellulare con sette impulsi di 1 secondo con un mm-sonda Sonicatore 2. (Nota: Tenere il freddo materiale ed evitare bolle eccessive Se schiuma accade, lasciare la sospensione cellulare sedersi su ghiaccio per un 2-3 min.). </li><li> Verificare l&#39;interruzione del&gt; 90% delle cellule utilizzando un emocitometro. </li><li> Centrifugare la miscela a 14.000 rpm a 4 ° C per 20 min in microcentrifuga refrigerata. </li><li> Trasferire il surnatante in una nuova provetta Safe-Lock 2.0 e determinare la concentrazione di proteine. </li></ol> 3. Preparazione delle cellule per preparazioni iniettabili <ol><li> Per ciascuna aliquota iniezione 7x10 6 PBMC in provette Safe-Lock da 2,0 ml. </li><li> Centrifugare a 6000 rpm per un minuto in microcentrifuga e rimuovere il surnatante. </li><li> Risospendere le cellule in PBS con o senza antigeni. Regolare il volume di iniezione di 35 ml con PBS. Il seguente schema è usato per le iniezioni: Controllo negativo: PBMC + PBS Controllo positivo: PBMC + TT / DT (25 &amp; mu; G / iniezione) Sperimentale Antigen Specific Risposta: PBMC + test di Ag (4-8 mg / iniezione) Sperimentale Antigen regolamento specifico: PBMC + test di Ag + TT / DT </li></ol> 4. Pre-misura, iniezione e post-misurazione <ol><li> Anestetizzare CB17 SCID mouse con isoflurano. Misurare lo spessore zampa posteriore utilizzando una pinza a molla. Mettere pinza al centro del cuscinetto plantare, con un bordo di toccare l&#39;ultimo pad camminata del piede, per fornire un punto di riferimento per mantenere il sito di misura costante. Spessore zampa è registrato quando manometro si è stabilizzata. </li><li> Iniettare lentamente sospensioni cellulari per via sottocutanea nei cuscinetti plantari dei topi utilizzando ½ cc siringhe da insulina con ago 28-gauge. Eseguire l&#39;iniezione con l&#39;ago rivolto verso le dita dei piedi, e lo smusso rivolto verso l&#39;alto. (Nota: assicurarsi che non ci siano perdite). </li><li> 18-24 ore dopo l&#39;iniezione, anestetizzare il mouse con la misura isoflurano e ripetizione della zampa gonfiore. </li><li> Subtragire lo spessore di ogni zampa prima dell&#39;iniezione dal valore dopo l&#39;iniezione per ottenere il valore gonfiore zampa, esprime i dati in unità di 10 -4 pollici. Calcolare l&#39;antigene-specifica gonfiore netta sottraendo il controllo footpad gonfiore (PBMC + PBS) dai valori gonfiore zampa ottenuti dai trattamenti (PBMC + donatore alloantigene, TT / DT, o donatore alloantigene + TT / DT). Una risposta positiva di controllo per richiamare l&#39;antigene TT / DT di ≥ 25x10 pollici -4 oltre risposta di fondo a PBS è necessario per il test per essere considerato valido. </li><li> Determinare l&#39;inibizione di risposte di richiamo in presenza di antigeni donatori confrontando il gonfiore netto di ogni iniezione utilizzando la seguente formula: <img alt="Equazione 1" fo:src="/files/ftp_upload/4454/4454eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4454/4454eq1.jpg" /></li></ol>

<ol><li>Carrodeguas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans+vivo+analysis+of+human+delayed-type+hypersensitivity+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity.</a> Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).</li>
<li>VanBuskirk, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+allograft+acceptance+is+associated+with+immune+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Human allograft acceptance is associated with immune regulation.</a> J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).</li>
<li>Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+and+injection+site+are+crucial+for+detecting+linked+suppression+in+transplant+recipients+by+trans-vivo+DTH+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay.</a> Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).</li>
<li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+tolerance+to+a+maternal+kidney+transplant+is+selective+for+HLA+class+II%3A+Evidence+from+trans-vivo+DTH+and+alloantibody+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Immunology%22%5BJournal%5D)">Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis.</a> Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).</li>
<li>Geissler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+liver+allograft+acceptance+and+the+%27tolerance+assay%27%3A+In+vitro+anti-donor+T+cell+assays+show+hyporeactivity+to+donor+cells+but%2C+unlike+DTH%2C+fail+to+detect+linked+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay': In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression.</a> Transplantation. 72, 571-580 (2001).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+liver+allograft+acceptance+and+the+%27tolerance+assay%27.+II.+donor+HLA-A%2C+-B+but+not+DR+antigens+are+able+to+trigger+regulation+of+DTH%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay'. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH.</a> Hum. Immunol. 63, 862(2002).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minor+H+Antigen+HA-1-specific+Regulator+and+Effector+CD8%2B+T+Cells%2C+and+HA-1+Microchimerism%2C+in+Allograft+Tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance.</a> J. Exp. Med. Cai, J., et al. 199, 1017-1023 (2004).</li>
<li>Rodriguez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulation+and+graft+survival+in+kidney+transplant+recipients+are+both+enhanced+by+human+leukocyte+antigen+matching%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching.</a> Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD4%2BCD25low+adaptive+T+regulatory+cells+suppress+delayed-type+hypersensitivity+during+transplant+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance.</a> J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).</li>
<li>Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+type+determines+the+mechanism+of+bystander+suppression+by+adaptive+T+regulatory+cells+specific+for+the+minor+antigen+HA-1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1.</a> J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+reduction+of+immunosuppression+in+older+renal+transplant+recipients+who+exhibit+donor-specific+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation.</a> Transplantation. 88, 533-541 (2009).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretransplant+immune+regulation+predicts+allograft+outcome%3A+bidirectional+regulation+correlates+with+excellent+renal+transplant+function+in+living-related+donor-recipient+pairs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs.</a> Transplantation. 93, 283-290 (2012).</li>
<li>Knechtle, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+limited+use+of+tacrolimus+to+avoid+rejection+in+an+alemtuzumab+and+sirolimus+regimen+for+kidney+transplantation%3A+clinical+results+and+immune+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring.</a> Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).</li>
<li>Haynes, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-specific+indirect+pathway+analysis+reveals+a+B-cell-independent+signature+which+reflects+outcomes+in+kidney+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients.</a> Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).</li>
<li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17-dependent+cellular+immunity+to+collagen+type+V+predisposes+to+obliterative+bronchiolitis+in+human+lung+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants.</a> J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).</li>
<li>Bobadilla, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TH-17%2C+Monokines%2C+Collagen+Type+V%2C+and+Primary+Graft+Dysfunction+in+Lung+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).</li>
<li>Olson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+prostate+tumor+antigen-specific+CD8%2B+regulatory+T+cells+are+inhibited+by+CTLA-4+or+IL-35+blockade%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade.</a> J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).</li>
</ol>

Gli autori di questo manoscritto non hanno conflitti di interesse da dichiarare.

Il saggio DTH trans-vivo è un test diagnostico romanzo con un potenziale applicazione clinica nella valutazione risposte mediate da cellule nel trapianto, cancro e pazienti autoimmuni. E &#39;prezioso perché non solo è utile nel monitoraggio delle risposte effettrici richiamo T, ma anche in grado di rilevare le risposte T regolatorie. Un modo affidabile per rilevare regolamento DTH umano potrebbe predire la sicurezza di recesso dell&#39;immunosoppressione in pazienti che sono candidati per studi clinici in monoterapia o...

<table><tbody><tr><td>Tubo ACD per il prelievo del sangue</td><td>BD</td><td>02-684-26</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo per la separazione dei linfociti</td><td>Cellgro</td><td>25-072-CV</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina fosfato di Dulbecco</td><td>Cellgro</td><td>21-031-CM</td><td>Senza calcio &amp;e magnesio</td></tr><tr><td>Buffer di lisi ACK</td><td>BioWhittaker</td><td>10-548E</td><td></td></tr><tr><td>TT/DT o EBV</td><td>Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc.</td><td></td><td>TT/DT 25 &amp;mu;g/iniezione EBV 8 &amp;mu;g/iniezione</td></tr><tr><td>Inibitore delle proteasi PMSF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Eosina per il conteggio cellulare</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-6003</td><td></td></tr><tr><td>Alloantigene</td><td></td><td></td><td>Antigeni HLA purificati, peptidi allotipici sintetici possono essere utilizzati al posto di lisati cellulari donatori privi di cellule</td></tr><tr><td>tubi da centrifuga sterili da 50 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-443-18</td><td></td></tr><tr><td>Pipette da 10 ml e pipettatore</td><td>BD Falcon</td><td>13-675-20</td><td></td></tr><tr><td>tubi con chiusura di sicurezza da 2 ml</td><td>Costar</td><td>3213</td><td></td></tr><tr><td>1000 &amp;mu;l, 100 &amp;mu;l , 10 &amp;mu;pipette con punte sterili</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Emocitometro</td><td>Fisher</td><td>02-671-10</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga a grandezza naturale e microcentrifuga</td><td>Beckman Coulter/Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siringhe per insulina da 1/2 cc o da 1 cc</td><td>Becton Dickinson</td><td>14-826-79</td><td>ago da 28 gauge</td></tr><tr><td>Vibracell sonicator</td><td>Divtech Equipment Co. Sonocs Materials Inc</td><td></td><td>sonda da 2 mm</td></tr><tr><td>Calibro di spessore per diaframmi</td><td>Mitutoyo, Giappone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>topi SCID</td><td>Harlan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Healthcare</td><td></td><td>Anestesia inalatoria</td></tr></tbody></table>

trans-vivo delayed type ipersensibilità assay per antigen regolamento specifico

Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation

Risposta di ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è un rapido in manifestazione in vivo della risposta immunitaria delle cellule T-dipendente ad un antigene estraneo (Ag), che il sistema immunitario ospite ha sperimentato nel recente passato. Reazioni DTH sono spesso divisi in una fase di sensibilizzazione, riferendosi all&#39;esperienza iniziale antigene, e una fase sfida, che segue solitamente parecchi giorni dopo la sensibilizzazione. La mancanza di una risposta di ipersensibilità di tipo ritardato per un richiamo Ag dimostrato da test cutaneo è spesso considerato come una prova di anergia. Il dosaggio DTH tradizionale è stato usato efficacemente nel diagnosticare infezioni microbiche molti. Nonostante la condivisione funzioni immunitarie simili come infiltrazione linfocitaria, edema e necrosi tissutale, il DTH diretto non è una tecnica diagnostica fattibile in pazienti trapiantati causa della possibilità di iniezione diretta conseguente sensibilizzazione ad antigeni donatori e perdita del trapianto. Per evitare questo problema, il ronziouno-a-mouse &quot;trans-vivo&quot; test DTH è stato sviluppato 1,2. Questo test è essenzialmente un trasferimento di test DTH, in cui il sangue cellule umane mononucleate periferiche (PBMC) e gli antigeni specifici sono stati iniettati per via sottocutanea nei padiglioni auricolari o zampa di un topo ingenua e DTH-come gonfiore viene misurata dopo 18-24 ore 3. La presentazione dell&#39;antigene da cellule presentanti l&#39;antigene umano come i macrofagi o DCS a cellule T nei tessuti altamente vascolare del mouse attiva la cascata infiammatoria e attrae le cellule immunitarie del mouse con conseguente risposte gonfiore. La risposta è antigene-specifici e richiede preventiva antigene sensibilizzazione. Una risposta DTH donatore-reattiva positiva nel test Tv-DTH riflette che il paziente trapiantato ha sviluppato una disposizione immunitaria pro-infiammatoria verso alloantigeni innesto. La caratteristica più importante di questo saggio è che può anche essere utilizzato per rilevare le cellule T regolatorie, che causano la soppressione astanti. Soppressione di un astanteDTH risposta richiamo alla presenza di antigeni del donatore è caratteristica di trapianto di rene-accettati 2,4-14. Il monitoraggio dei pazienti trapiantati per alloreattività e regolazione con Tv-DTH può identificare un sottogruppo di pazienti che potrebbero trarre beneficio dalla riduzione di immunosoppressione senza elevato rischio di rigetto o di deterioramento della funzione renale. Un&#39;area promettente è l&#39;applicazione del saggio Tv-DTH nel monitoraggio di autoimmunità 15,16 e anche in immunologia tumorale 17.

1. Valutazione del trapianto di rene per la risposta antigene-specifica donatore utilizzando test Tv-DTH Per testare il donatore-reattiva immunità cellulare nel trapianto di rene abbiamo iniettato PBMC di questi pazienti con antigeni del donatore da soli o con un richiamo antigene tossoide tetanico (TT). Come i pozzetti di controllo positivo sono stati iniettati con sola TT. Osserviamo tre modelli principali di ipersensibilità di tipo ritardato nei pazienti trapiantati (Figura 1).</stro...

Descriviamo un test diagnostico prezioso che potrebbe potenzialmente essere utilizzato per decidere il ritiro di immunosoppressione dopo trapianto senza elevato rischio di rigetto del trapianto. Il test utilizza i principi di ipersensibilità di tipo ritardato e fornisce una valutazione accurata del donatore risposte immunitarie effettrici e normativi specifici montati dai destinatari.

Trans-vivo Delayed Type Ipersensibilità Assay per Antigen regolamento specifico

La risposta di ipersensibilità ritardata (DTH) è una rapida manifestazione in vivo della risposta immunitaria T-cellulo-dipendente a un antigene (Ag) estraneo che l'ospite...

L'obiettivo generale di questa procedura è utilizzare il saggio DTH trans vivo per monitorare sia le risposte specifiche per l'antigene pro-infiammatorie che anti-infiammatorie nei soggetti umani. In primo luogo, isolare le cellule mononucleate del sangue periferico dal sangue periferico del soggetto umano. Successivamente, mescolare la preparazione di PBMC con PBS.Antigene di richiamo, antigene del test e antigene del test più antigene di richiamo. Procedere con le misurazioni preliminari delle zampe e iniettare le miscele preparate nei topi. Ripetere le misurazioni delle zampe dopo 24 ore. Tre.Pattern definitivi di risposte DTH possono essere di tipo regolatorio, non regolatorio e sensibilizzato. Il saggio trans vivo di ipersensibilità ritardata può essere applicato per determinare parametri clinici come le risposte alloreattive, in cui la fonte dell'antigene è rappresentata dalle cellule del donatore del trapianto. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi in vitro esistenti consiste nella possibilità di rilevare facilmente, mediante un unico sistema sperimentale, sia le risposte pro-infiammatorie che quelle regolatorie verso antigeni alloreattivi, autoantigen

trans-vivo-delayed-type-hypersensitivity-assay-for-antigen-specific

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici. Qui mostriamo come per indurre DTH attivo nei ratti Lewis e monitorare la risposta infiammatoria.

Induzione e Monitoraggio di Active ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) in ratti

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata da CCR7-memoria T effettrici (TEM) linfociti. Qui mostriamo come attivare antigene-specifiche cellule TEM, inducono DTH adottivi nei ratti Lewis e monitorare la risposta infiammatoria.

Induzione e Monitoraggio adottivi di ipersensibilità ritardata nei ratti

Tregs sono potenti soppressori del sistema immunitario. Vi è una mancanza di marcatori di superficie unica per definire loro, quindi, le definizioni di Tregs sono soprattutto funzionali. Qui descrivere un...

Umano In Vitro</emSoppressione> come strumento di screening per il riconoscimento di uno Stato precoce di squilibrio immunitario

Il video dimostra un metodo immunologico per monitorare in vivo la produzione di linfociti T citotossici indotti da adiuvanti o CTL. A un topo viene pre-iniettato linfociti T CD8+ di donatori geneticamente modificati e colorati con colorante proliferativo. L'iniezione sottocutanea di ovoalbumina con adiuvanti genera linfociti T CD8+ citotossici che vengono identificati dopo il prelievo attraverso l'immunocolorazione e la citometria a flusso.

Una tecnica immunologica per monitorare la generazione di linfociti T citotossici mediati da adiuvanti

Presentiamo qui un metodo per sviluppare cellule T regolatorie (Treg) specifiche per l'antigene funzionale (Ag) da cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) per l'immunoterapia dell'artrite autoimmune in un modello murino.

Lo sviluppo di cellule staminali derivate antigene-specifiche cellule T regolatorie contro autoimmunità

Questo documento descrive un metodo per misurare alloreattività in una popolazione mista di cellule T usando un flusso di imaging citometria.

Misura della T cellulare alloreattività Utilizzando Imaging Citometria a Flusso

Qui, presentiamo un protocollo per indurre la tolleranza nel trapianto e valutare in vitro e in vivo la capacità soppressiva delle sottopopolazioni cellulari distinti dal destinatario e lo stato immunitario del destinatario verso il donatore o antigeni esogeni.

In Vitro e In Vivo valutazione della attività soppressiva T, B e cellule mieloidi e risposte umorali dai destinatari del trapianto

L'obiettivo del presente protocollo è quello di consentire il rilevamento in vivo di uccisione di una cella di destinazione in un modello murino di antigene-specifiche.

In Vivo Test per la determinazione della funzione citolitica di cellule T antigene-specifiche utilizzando un modello di vaccinazione

Qui presentiamo un protocollo per l'aumento in vivo dell'induzione delle cellule T regolatorie gut-homing. In questo protocollo, le cellule dendritiche sono progettate per produrre localmente alte concentrazioni della vitamina D attiva (1,25-dihydroxyvitamin D o 1,25[OH]2D) e la vitamina attiva A (acido retinoico o RA) de novo.

In Vivo Augmentazione dell'induzione delle cellule T regolatorie Gut-Homing

Lo studio dimostra il ruolo della pelle nella modulazione delle risposte immunitarie nei topi attraverso l'immunizzazione epicutanea (EC). L'immunizzazione EC con un antigene proteico può sopprimere le risposte immunitarie nell'ipersensibilità da contatto o invertire la soppressione indotta dalla pelle se combinata con modelli molecolari associati a patogeni. L'immunizzazione EC si dimostra promettente come approccio efficace e senza ago all'immunoterapia.

Modello murino di immunomodulazione indotta per via epicutanea

Scopri l'assay trans vivo DTH per monitorare risposte immunitarie specifiche in pazienti trapiantati usando PBMC e topi SCID. Questo metodo aiuta a valutare la sicurezza della riduzione dell'immunosoppressione.

Trans-vivo Delayed Type Ipersensibilità Assay per Antigen regolamento specifico

Esplora altri video