Valutare Murino Resistenza Funzione Arteria Utilizzando myography Pressione

L'obiettivo generale del seguente esperimento è determinare la reattività vascolare in tempo reale dell'arteria resistente al topo in vitro in condizioni quasi fisiologiche. Ciò si ottiene montando un piccolo segmento del vaso su due micro cannule e mantenendolo alla pressione luminale fisiologica. Il vaso viene quindi ristretto con un agonista del recettore alfa uno, la fenilefrina, per studiare la capacità di qualsiasi farmaco di dilatare il vaso.

Sfidando il vaso ristretto con l'acetilcolina si valuta la sua capacità di dilatarsi in tempo reale attraverso un meccanismo endotelio dipendente. I risultati mostrano la variazione percentuale del diametro del lume in risposta all'acetilcolina e verificano che il deficit di SGC alfa uno provoca una compromissione della vasodilatazione endotelio-dipendente. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come la momografia a filo, è che la mamografia a pressione consente la caratterizzazione di piccoli microvasi, che sono più rilevanti nel mantenimento dell'omeostasi della pressione sanguigna rispetto ai vasi conduttanti più grandi.

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo cardiovascolare, come l'ipertensione, dove i vasi macro resistenti svolgono un ruolo fondamentale. Inizia con l'eutanasia di un topo con il pentobarbital. Ora apri la cavità addominale e inizia a sezionare il tessuto mesenterico.

Ora identifica un'arteria mesenterica del terzo ordine e isolala dal tessuto connettivo e adiposo. La differenziazione tra arterie e vene a livello dei microvasi è problematica quando non c'è sangue nei vasi. Quindi è preferibile farlo nell'animale intatto.

Quindi, tagliare un segmento lungo due o tre millimetri dell'arteria mesenterica del terzo ordine e metterlo in un piatto contenente mucchi. Tampone PSS. Il segmento arterioso non deve contenere alcuna ramificazione.

Preparare la myo camera riempiendo delicatamente le cannule attraverso le valvole di ingresso e di uscita con cumuli di soluzione PSS Da una siringa da 10 millilitri, tenere presente che una pressione eccessiva può danneggiare il fragile trasduttore collegato alle cannule. Dopo aver riempito bene le cannule, chiudere entrambe le valvole. Ora trasferisci il segmento arterioso isolato nella camera e monta un'estremità del vaso sulla cannula destra.

Legandolo accuratamente con un filo sottile di sutura di nylon utilizzando una siringa, sciacquare e riempire il recipiente con la soluzione a cumulo attraverso la valvola di ingresso. Ora monta l'altra estremità del vaso sulla cannula sinistra e fissa la cannula al vaso con la sutura di nylon. Riempire la camera con un massimo di 10 millilitri di soluzione cumulativa.

Verificare la presenza di perdite spingendo delicatamente la soluzione in cumulo attraverso la valvola di ingresso con l'aiuto di una siringa. Ora posiziona la camera sotto la videocamera. Avviare l'ossigeno e riscaldare la camera a 37 gradi Celsius mentre la valvola di ingresso è chiusa, collegata al tubo P one dal primo serbatoio di soluzione a cumulo.

Lascia che le bolle e la soluzione passino attraverso il tubo fino a quando non ci sono bolle nel tubo. Quindi aprire la valvola. Collegare alla valvola sinistra della camera con il tubo P due.

Provenendo dal regolatore di pressione, assicurarsi che non vi siano bolle o perdite in tutto l'impianto. Vai al menu della pressione sul pannello dell'interfaccia myo o nel software e accendi la pompa mentre spegni il flusso. Apri il programma e fai clic su Raccogli.

È ora possibile monitorare e analizzare il lume del vaso, il diametro del vaso e lo spessore della parete. Per aumentare gradualmente la pressione interluminale, selezionare la pressione P uno e inserire una sequenza di pressione ascendente. Valori da cinque a 60 millimetri di recipienti di mercurio, a volte attorcigliati o contorti all'aumentare della pressione, quindi regolare la tensione o la deformazione di conseguenza con l'aiuto di un micro posizionatore verticale o longitudinale.

Una volta che la pressione è a 60 millimetri e il bagno è a 37 gradi Celsius, equilibrare il recipiente per almeno 45 minuti e fino a un'ora durante il periodo di equilibratura. Cambiare la soluzione del bagno una volta con i cumuli di preriscaldamento. Ora che la sezione arteriosa è equilibrata, applicare 10 millilitri di soluzione depolarizzante di cloruro di potassio a 37 gradi Celsius.

La muscolatura liscia si depolarizzerà completamente e raggiungerà la massima costrizione. Dopo aver ottenuto una costrizione stabile, sciacquare il bagno con soluzione a cumulo tre volte a intervalli di 10 minuti. Ora controlla la vitalità del vaso e l'integrità dell'endotelio.

Innanzitutto, pre-restringere il recipiente aggiungendo fenilefrina per tendere alle cinque moli negative per litro. Quando è stata ottenuta una costrizione stabile, eseguire una curva di risposta alla vasodilatazione della concentrazione cumulativa mediante l'aggiunta sequenziale di dosi crescenti di acetilcolina da 10 a negative, da nove a 10 a cinque moli per litro negativi dopo l'ultima dose di acetilcolina. Sciacquare il preparato con mucchi tre volte a intervalli di 10 minuti.

Ora, determinare il diametro del lume passivo applicando PSS privo di calcio contenente due millimoli di EGTA per litro dai tracciati registrati. Misurare il diametro del lume per ogni risposta alla dose, che verrà utilizzato per calcolare tutti i parametri. Esprimere la risposta di rilassamento dell'acetilcolina come un confronto tra il trattamento con l'agonista e il tampone privo di calcio in termini di quanto ciascuno ha alterato il diametro del lume dalla costrizione indotta dalla fenilefrina.

La miografia a pressione di stato è stata utilizzata per studiare il rilassamento vascolare in risposta all'acetilcolina nelle arterie di resistenza mesenterica isolate da topi knockout wild type e SGC alpha one sugli sfondi S sei e sei neri e pre-ristretti con fenilefrina. La carenza di SGC alfa uno è stata associata alla ridotta capacità dell'acetilcolina di indurre il rilassamento vascolare indipendentemente dal background genetico dei topi studiati. Tuttavia, il rilassamento endotelio dipendente dei topi privi di SGC Alpha 1 era più marcatamente compromesso nello sfondo S sei rispetto allo sfondo nero sei.

Insieme, questi risultati suggeriscono che la ridotta sensibilità del sistema vascolare al rilassamento endoteliale dipendente può contribuire all'ipertensione specifica del ceppo nei topi knockout SGC Alpha one Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in una o due ore se eseguita correttamente. Oltre a questa procedura, altri metodi come la microscopia confocale possono essere eseguiti contemporaneamente sui vasi sanguigni vitali. Ciò, ad esempio, consentirebbe la misurazione delle concentrazioni intracellulari di ferro che possono aiutare a identificare i meccanismi di segnalazione sottostanti.