Microscopia a fluorescenza metodi per determinare la vitalità di batteri in associazione con cellule di mammifero

Questo esperimento di microscopia a fluorescenza valuta la vitalità dei singoli batteri associati alle cellule ospiti e determina la vitalità batterica in diverse posizioni subcellulari. In primo luogo, per identificare i batteri esterni, esporre le cellule infette a un reagente fluorescente specifico per la permeasi batterica, l'ospite infetto, in presenza di coloranti fluorescenti che discriminano i batteri vitali da quelli non vitali in base all'integrità della membrana batterica. Quindi, per indicare dove si trovano i batteri all'interno delle cellule ospiti, incubare le cellule infette con un anticorpo accoppiato in fluorescenza a un marcatore di interesse.

Le immagini immunofluorescenti risultanti possono determinare la percentuale di batteri vitali all'interno e all'esterno delle cellule ospiti e la localizzazione subcellulare dei batteri intracellulari vitali rispetto a quelli non vitali. A differenza dei saggi per il conteggio delle colonie, dei saggi di protezione della gentamicina e della microscopia elettronica, questo metodo consente la valutazione diretta della vitalità dei singoli batteri. Può anche rivelare se i batteri in diversi compartimenti subcellulari hanno differenze nella loro vitalità.