Rilevamento di proteine prioniche anomale nel tessuto cerebrale mediante immunoistochimica

Prendi una diapositiva con una sezione fissa del cervello di mammifero che mostra aggregati di proteine prioniche mal ripiegate.

Trattare la sezione con acido formico per ridurre l'infettività degli aggregati prionici.

Trattare con un tampone acido all'interno di una camera a pressione idratata. Un calore elevato e un pH acido rompono i legami crociati proteici indotti dalla fissazione, smascherando gli epitopi antigenici.

Immergere in perossido di idrogeno per inattivare la perossidasi endogena, prevenendo la colorazione indesiderata del fondo.

Posizionare il vetrino in una piastra di copertura e aggiungere un tampone per mantenere l'idratazione dei tessuti.

Introdurre una soluzione bloccante, impedendo il legame di anticorpi non specifici.

Aggiungere un anticorpo primario specifico per gli aggregati prionici.

Rimuovere le molecole di anticorpi non legate. Introdurre un anticorpo secondario biotinilato che si lega all'anticorpo primario.

Rimuovere le molecole di anticorpi non legate. Aggiungere un enzima perossidasi biotinilata complessato con avidina che si lega alla biotina sull'anticorpo secondario.

Aggiungere un substrato cromogenico, che la perossidasi ossida in un prodotto c