Identificazione di un Murine eritroblasto sottopopolazione Enriched in enucleare Eventi da Multi-spettrale Imaging Citometria a Flusso

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di facilitare l'identificazione di eventi di enucleazione con una sottopopolazione di Erythroblast. Il primo passo è quello di creare una popolazione arricchita in eventi nucleanti. Ciò si ottiene mediante coltura di eritropoiesi in vitro, a lungo termine a partire da cellule di midollo osseo a bassa densità isolate da femori, tibia e ossa pelviche di un topo non stressato o coltura a breve termine.

A partire dai ple cytes della milza di un topo sottoposto precedentemente a flebotomia al fine di montare l'eritropoiesi da stress. Le cellule coltivate nella fase finale della coltura vengono fissate, permeate e colorate con i marcatori fluorescenti di interesse. Queste cellule vengono analizzate su un citometro a flusso di imaging e quindi analizzate per identificare le cellule sottoposte a enucleazione nella popolazione di cellule nucleanti che possono essere identificate le componenti di segnalazione e citoscheletriche che regolano e mediano il processo di enucleazione.