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DOI: 10.3791/51339-v
Francisco-Jose Fernandez-Gomez1, Fanny Jumeau1,2, Maxime Derisbourg1, Sylvie Burnouf1, Hélène Tran1, Sabiha Eddarkaoui1, Hélène Obriot1, Virginie Dutoit-Lefevre3, Vincent Deramecourt4, Valérie Mitchell2, Didier Lefranc3, Malika Hamdane1, David Blum1, Luc Buée1, Valérie Buée-Scherrer1, Nicolas Sergeant1
1Team Alzheimer & Tauopathies, Jean-Pierre Aubert Research Centre,Inserm UMR 837, 2EA 4308-Department of Reproductive Biology-Spermiology-CECOS,CHRU-Lille, 3EA2686-Laboratorie d'Immunologie,Faculté de Médecine - Pôle Recherche, 4Department of Neurology,CHRU-Lille
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Un protocollo di estrazione proteina comune con tampone di urea / tiourea / SDS per il tessuto cerebrale umano e topi permette indentification delle proteine da 2D-DIGE e la loro successiva caratterizzazione mediante mini 2DE immunoblotting. Questo metodo permette di ottenere risultati più riproducibili e affidabili da biopsie umane e modelli sperimentali.
L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di estrarre proteine dal tessuto cerebrale umano e di topo per l'analisi proteomica. Ciò si ottiene utilizzando un tampone di lisi comune per ottenere la stessa estrazione proteica adattata per approcci di elettroforesi bidimensionale. Successivamente, l'elettroforesi su gel con differenza di fluorescenza bidimensionale viene utilizzata per separare le proteine per l'identificazione della spettrometria di massa.
Segue un'elettroforesi su gel 2D in miniatura con immunoblotting per identificare le modifiche post-traduzionali. I risultati possono mostrare l'espressione proteica globale. Modifiche traduzionali dell'ospite a tutti i prodotti legamentosi e catalitici in base alle differenze nel punto isoelettrico e nel peso molecolare.
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