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DOI: 10.3791/51706-v
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Reti corticali sono controllati da un piccolo, ma diverso insieme di interneuroni inibitori. Indagine funzionale degli interneuroni richiede quindi la registrazione mirata e l'identificazione rigorosa. Qui descritto è un approccio combinato che coinvolge le registrazioni whole-cell da coppie singole o sinapticamente-accoppiati di neuroni con etichettatura intracellulare, post-hoc analisi morfologica e immunocitochimica.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di caratterizzare gli effetti mediati dal recettore GABA B negli interneuroni positivi alla parvalbumina dell'ippocampo identificati. Ciò si ottiene producendo prima fette acute di ippocampo di alta qualità. Il secondo passo consiste nell'utilizzare un videomicroscopio per selezionare i neuroni in base all'espressione venosa di YFP e alle caratteristiche note dei neuroni positivi all'albumina parallela.
Successivamente, si ottengono registrazioni di patch clamp su cellule intere e si utilizza la stimolazione extracellulare o le registrazioni accoppiate per esaminare gli effetti mediati dal recettore GABA B. Il passo finale consiste nel visualizzare i neuroni e confermare che i neuroni registrati sono in realtà par albumina positivi e sono neuroni inibitori parasomatici o dendritici. In definitiva, questo metodo consente la caratterizzazione degli effetti inibitori mediati dal recettore GABA B e consente una classificazione inequivocabile degli interneuroni registrati.
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