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DOI: 10.3791/52467-v
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L'obiettivo di questo metodo è di descrivere l'uso di un sistema microfluidico per lo sviluppo del biofilm multispecie che contengono specie tipicamente identificate nella placca dentale sopragengivale umana. Metodi per descrivere l'architettura biofilm, la vitalità biofilm, e un approccio alla raccolta biofilm per le analisi di coltura-dipendente o indipendente dalla cultura sono evidenziati.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di creare biofilm di placca dentale multispecie rappresentativi dal punto di vista della composizione. Parallelamente all'analisi, ciò si ottiene creando prima un terreno rappresentativo e un inoculo. L'inoculo viene quindi introdotto nel chip microfluidico dopo un'incubazione notturna, si forma un biofilm all'interno del micro canale.
Infine, il biofilm viene lavato e colorato per la microscopia a scansione laser confocale a due confocali o la microscopia a epifluorescenza. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come le celle a flusso è che si tratta di un sistema ad alta produttività che consente di eseguire più esperimenti in parallelo utilizzando meno materiali e non richiedendo terreni di laboratorio artificiali. Per iniziare, raccogli campioni di saliva da una coorte di cinque o più volontari in singole provette di plastica da 50 millilitri.
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