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DOI: 10.3791/53456-v
Peter Engerer1, Gabriela Plucinska1,2, Rachel Thong1,3, Laura Trovò1, Dominik Paquet4,5,6, Leanne Godinho1
1Institute of Neuronal Cell Biology,Technische Universität München, 2Cell Biology, Department of Biology, Faculty of Science,Utrecht University, 3Faculty of Biology,Ludwig-Maximilians-Universität-München, 4Adolf-Butenandt-Institute, Biochemistry,Ludwig-Maximilians-Universität-München, 5German Center for Neurodegenerative Diseases, 6Laboratory of Brain Development and Repair,The Rockefeller University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
L'imaging del comportamento dinamico degli organelli e di altre strutture subcellulari in vivo può far luce sulla loro funzione in condizioni fisiologiche e patologiche. Qui, presentiamo metodi per marcare geneticamente due organelli, centrosomi e mitocondri, e per l'imaging delle loro dinamiche in embrioni di zebrafish viventi utilizzando la microscopia a campo largo e confocale.
L'obiettivo generale di questo metodo di imaging è studiare gli organelli subcellulari in un vertebrato in vivo. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia cellulare neuronale, come la dinamica dei mitocondri o i centrosomi in un contesto in-vivo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'intero esperimento può essere eseguito in un vertebrato intatto, senza la necessità di alcuna procedura chirurgica.
Questo metodo può fornire informazioni non solo sulle dinamiche subcellulari in condizioni fisiologiche, ma può anche essere applicato a studi di modelli di tesi, come il morbo di Alzheimer. Dopo aver generato embrioni che esprimono transitoriamente mediante microiniezione, o aver ottenuto embrioni da linee transgeniche stabili, secondo il protocollo di testo, alla fine del primo giorno, screening per ovuli morti o non fecondati. Utilizzando una pipetta di trasferimento in plastica, trasferire gli embrioni vitali nella soluzione di Danieleau contenente 1x PTU per prevenire la formazione di pigmenti e mantenere gli embrioni nella soluzione di Danieleau contenente 1x PTU fino allo screening per l'espressione transgenica.
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