Name: Costruzione di fogli modulare idrogel per micropatterned macro-scala 3D Cellular Architettura (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-11T10:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Impara a costruire fogli modulari di idrogel micropatterned per sistemi di coltura cellulare 3D. Questa tecnica economica consente di creare microambienti cellulari controllati per studi di ingegneria tissutale avanzati.

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Questa ricerca è stata supportata da un programma nazionale di laboratorio di ricerca leader (sovvenzione NRF-2013R1A2A1A05006378) attraverso la National Research Foundation of Korea finanziato dal Ministero della Scienza, delle TIC e della pianificazione futura. Gli autori riconoscono anche un programma sanitario KAIST Systems.

1. Preparazione del micropatterned Stampi e idrogel <ol><li> Produrre i modelli micro scala desiderati utilizzando SU-8 photoresist sulla superficie di un wafer di silicio mediante due fasi tecnica fotolitografia 15,17 standard per colata stampi PDMS. L&#39;esempio illustrato utilizza un modello di rete fegato lobulo-like (Figura 1). </li><li> Pesare PDMS e una soluzione di catalizzatore con un rapporto di 1: 5 (cioè, 12.5 g di PDMS e 2,5 g di induritore). </li><li> Mescolare il 15 g della soluzione di fondo, degassare le bolle in una camera a vuoto, e poi diffondere la soluzione mista su una superficie micropatterned della fetta di silicio in modo uniforme in un piatto foil colata. </li><li> Posizionare il wafer di silicio su una piastra riscaldata 65 ° C per 90 min su una superficie piana per curare le PDMS. </li><li> Rimuovere le PDMS curate dal piatto di colata e il wafer di silicio. </li><li> Tagliare i bordi delle PDMS e posizionarlo su una capsula di Petri da 100 mm di diametro conil lato micropatterned up. </li><li> Lavare le PDMS curate micropatterned sulla capsula di Petri con il 70% di etanolo e acqua distillata per la sterilizzazione primario. Poi, asciugarle completamente per 10 minuti in forno a 65 ° C. </li><li> Sciogliere e miscelare O / N 3 g di un tensioattivo non ionico in polvere in 100 ml di acqua distillata, creando un 3% (w / v) di rivestimento. </li><li> Posizionare i PDMS micropatterned stampi in un pulitore plasma e pulirli per 1 min (85 W, 0,73 mbar) per creare una superficie idrofila, per facilitare l&#39;aggiunta di liquidi acquosi. Poi, rivestire la superficie delle PDMS con la soluzione di 100 ml di tensioattivo per almeno 3 ore (ORO / N) utilizzando un bilanciere di laboratorio. </li><li> Lavare la soluzione di tensioattivo dagli stampi PDMS e asciugare completamente in forno a 65 ° C per 10 min. Poi, sterilizzare ogni stampo micropatterned da esposizione a raggi ultravioletti (UV) oltre 30 min. </li></ol> 2. Preparare la sospensione cellulare in un idrogel Precursore <ol><li> Apreparare idrogel precursore, sciogliere 0,1 g di alginato di sodio in polvere a 10 ml di tampone fosfato salino (PBS), creando un 1% (w / v) precursore alginato. Per sciogliere completamente la polvere, incubare e mescolarle O / N. </li><li> Filtrare la soluzione attraverso un filtro da 0,22 micron collegato ad una siringa da 1 ml. </li><li> Cultura le cellule HepG2 in modificata mezzo di Eagle Dulbecco (DMEM) supplementato con 10% di siero fetale bovino e 1% di penicillina-streptomicina su un piatto di coltura di tessuto convenzionale fino 70% - 80% di confluenza in 5% CO 2 incubatore umidificato a 37 ° C . </li><li> Lavare le cellule una volta con PBS, e quindi trypsinize aggiungendo 1 ml di 0,05% tripsina-EDTA per 4 minuti in un incubatore umidificato CO 2 5% a 37 ° C. Centrifugare le cellule raccolte dalla piastra di coltura a 250 xg per 3 min e risospendere con 1 ml di PBS dopo la rimozione del supernatante. </li><li> Contare il numero di cellule singole distribuite in PBS usando una cella automatizzatacontatore. </li><li> Dopo centrifugazione a 250 xg per 3 min e la rimozione PBS, aggiungere 1 ml di 1% (w / v) di una soluzione di alginato di sodio al restante pellet e mescolare delicatamente con pipettamento. La densità di semina finale delle cellule dovrebbe essere di 5 x 10 6 - 10 7 cellule / ml. Incubare la sospensione cellulare / idrogel in 5% CO 2 incubatore umidificato a 37 ° C. </li></ol> 3. Caricamento e Cross-linking di cellule / Hydrogel Suspension <ol><li> Sciogliere 1,47 g di cloruro di calcio disidratare in 100 ml di DDH 2 O per produrre un reagente di reticolazione (ad esempio, 100 mM CaCl 2 · 2H 2 O in DDH 2 O). </li><li> Risciacquare l&#39;interno di un umidificatore con trasduttore ultrasonico utilizzando 70% di etanolo, e riempirlo con 200 ml di reagente di reticolazione. L&#39;umidificatore è largo 110 mm, 300 mm di lunghezza e 170 mm di profondità (ovvero 110 mm x 300 mm x 170 mm (L x A x P)). </li><li> Posizionare il PDMS micropatternedstampi in un pulitore plasma e pulirli per 1 min a 85 W per creare una superficie idrofila. </li><li> Caricare progressivamente 7,2 ml di sospensione cellulare / idrogel ben miscelato sul bordo del micropattern nello stampo. L&#39;esempio illustrato utilizza un modello di rete fegato lobulo-like (Figura 1). Il volume della sospensione dipende dal modello topografico. </li><li> Per raggiungere gelificazione della sospensione cellulare / idrogel, accendere l&#39;umidificatore e verificare che l&#39;umidificatore produce una nebbia del reagente di reticolazione. Spruzzare il reagente di reticolazione sul precursore idrogel per 5 min, coprendo la superficie topografica degli stampi PDMS in un intervallo di 5 cm. Nota: Le distanze più lunghe e più breve di 5 cm possono causare la gelificazione incompleta e irregolare, rispettivamente. Assicurarsi che l&#39;umidificatore ha un tasso di spruzzatura di 250 ml / h, producendo 20 ml di nebbia del reagente di reticolazione in 5 min. </li><li> A seguito del processo di cross-linking, spegnere l&#39;umidificatore e riempire il mo PDMSlds con PBS. </li></ol> 4. Trattamento delle fogli singoli modulare idrogel <ol><li> Staccare ogni foglio idrogel indurito dagli stampi micropatterned via pipettando PBS delicatamente intorno al foglio di idrogel con un puntale 200 l. </li><li> Pick up ogni foglio idrogel mobile usando un 1.000 ml fine punta della pipetta end-cut. Ogni maglia foglio idrogel lobulo-come il fegato ha dimensioni di 8 millimetri x 8,7 millimetri, ed essere 100 - 200 micron di spessore. </li><li> Trasferire un singolo strato di foglio idrogel in 1 ml di DMEM in un 12-pozzetti, e coltivare le cellule in vitro in modo flottante usando l&#39;idrogel costrutto come componente unità della 12-pozzetti più di una settimana in un 5 % di CO 2 umidificata incubatore a 37 ° C. Sostituire il terreno di coltura ogni altro giorno. </li></ol> 5. Fogli idrogel Assemblea di Sovrapposizione <ol><li> Ripetere i passaggi 1,1-1,5 per produrre un telaio PDMS con dimensioni di 18 millimetri x 18 mm x 4 mm (L xH x D), e che contiene strutture 170 micron-alto pilastro sulla superficie inferiore. Utilizzare 42 g della miscela di PDMS e agente reticolante, con lo stesso rapporto come al punto 1.2. Mettere uno stampo di policarbonato specializzata sul wafer di silicio per il telaio PDMS per creare un telaio interno con dimensioni di 8 millimetri x 9 mm x 2 mm (L x A x P). </li><li> Sterilizzare telaio PDMS e 180 micron-pori carte da filtro nylon sommerso in acqua distillata e pinzette in autoclave per 15 minuti a 121 ° C. </li><li> Posizionare il telaio PDMS sterilizzato su un quarto di un pezzo di carta da filtro in nylon (con un diametro di 5 cm) in una capsula di Petri del diametro di 60 mm. </li><li> Trasferire un foglio idrogel modulare nell&#39;interno del telaio PDMS utilizzando un 1.000 microlitri punta della pipetta fine taglio. I fogli idrogel utilizzati per l&#39;assemblaggio devono essere coltivati ​​per almeno un giorno dopo che sono state fabbricate. </li><li> Allineare il bordo di ciascun foglio idrogel modulare con il telaio PDMS utilizzando un puntale 200 microlitri vuoto. </li><li> Ripetere i punti 5.4 e 5.5 utilizzando fogli di idrogel modulari in modo da formare una pila di 4 - 6 strati. </li><li> Rimuovere il mezzo di coltura da fluisce fuori attraverso le strutture pilastro nella parte inferiore del telaio PDMS. Poi aggiungere 2 ml di soluzione di alginato (2% w / v) ad un angolo del costrutto multistrato. </li><li> Spray una nebbia del reagente reticolazione per 30 sec sul costrutto multistrato per fissare i bordi di ogni strato con quelli di un altro. Utilizzare 2 ml di nebbia del reagente di reticolazione (ad una velocità di 250 ml di spruzzatura / hr). </li><li> Sciacquare il costrutto multistrato delicatamente con 400 microlitri DMEM e rimuovere il telaio PDMS con una pinzetta. </li><li> Rimuovere il costrutto multistrato dalla carta da filtro strofinando delicatamente con una cella sollevatore dopo l&#39;aggiunta di 4 ml di DMEM. </li><li> Trasferire il multistrato costruire ad una piastra da 6 pozzetti contenente 3 ml di DMEM con carta da filtro, e coltivare le cellule in vitro in modo flottante, con l&#39;idrogel come costruttoun&#39;impalcatura cellulare multi-scala nella piastra da 6 pozzetti più di una settimana in un 5% CO 2 incubatore umidificato a 37 ° C. Sostituire il terreno di coltura ogni altro giorno. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questo protocollo fornisce un semplice metodo per fabbricare fogli idrogel modulari, e loro assemblaggio per formare scaffold cellulari 3D. Per costruire strutture alginato modellata chiare in breve tempo, dobbiamo identificare un processo di reticolazione che può creare strutture sufficientemente rigido per mantenere le microdisegni complessi dallo stampo, così come mantenere la vitalità delle cellule e il metabolismo. Abbiamo sviluppato un processo di cross-linking, compresa una transizion...

Gli idrogel sono particolarmente promettenti biomateriali, e dovrebbero essere importante nella biologia di base, test farmacologici e la medicina. 1 Biofabrication di costrutti cellulari a base di idrogel-è stato suggerito di ridurre il ricorso alla sperimentazione animale, 2,3 sostituire tessuti trapiantabili, 4 e migliorare saggi cellulari. 5,6-contenenti acqua (idrocarburi) materiali viscoelastici (gel) permettono un gran numero di cellule da incapsulare e mantenuto in una struttura scaffold per controllare il microambiente cellulare 3D. In combinazione con la guida di tecnologie microfluidica o micropatterning, la geometria dei costrutti idrogel può essere controllata con precisione in scala cellulare. Fino ad oggi, una varietà di forme di idrogel, tra particelle, 7 - 9 fibre, 10 - 12 e fogli 13 - 15 sono stati utilizzati come unità edilizie in bottom-up approdolori alla fabbricazione di macro scala architetture multi-cellulari. Entrambe le particelle e fibre a base di idrogel-sono stati prontamente e rapidamente realizzati per applicazioni come ambienti cellulari micro-scala, con controlli fluidici che utilizzano dispositivi microfluidici. Tuttavia, come le unità di base dei tessuti ingegnerizzati, sarebbe complicato di riordinarli e per allargare il loro volume come costrutti macro-scala. 16 E &#39;più difficile da raggiungere costrutti macro-scala per la produzione di moduli base micron dimensioni. Unità lastriforme di costrutti idrogel a base-possono essere utilizzati per aumentare il volume di scaffold tramite un semplice processo di assemblaggio. Consequentially, strati sovrapposti di fogli idrogel forniscono non solo un aumento volumetrico ma anche un&#39;estensione geometrico in uno spazio 3D. Abbiamo precedentemente riportato un metodo per fabbricare fogli idrogel micropatterned, 13 - 15 insieme al loro assemblaggio in multi-layarchitetture cellulari strati sovrapposti. La tecnica consente micropatterning complessa e modularità di costrutti cellulari tramite un processo di sovrapposizione di strutture multistrato. Attraverso la realizzazione di fogli impilati idrogel modulari, che sono micropatterned, un sistema di coltura cellulare 3D con un microambiente cellulare macroscala controllato può essere realizzato. Questo protocollo video descrive un metodo di fabbricazione semplice ma potente che può essere utilizzato per costruire fogli idrogel modulari, in base alla linea cellulare di carcinoma epatico umano (HepG2). Dimostriamo qui semplice manipolazione di questi fogli di idrogel modulari fantasia, ed il loro assemblaggio in una struttura a più livelli.

<table><tbody><tr><td>Kit elastomero siliconico Sylgard 184</td><td>Dow Corning Corporation</td><td>000000000001064291</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443</td><td>Tensioattivo non ionico in polvere&nbsp;</td></tr><tr><td>Acido alginico sale sodico, bassa viscosità</td><td>Alfa Aesar</td><td>B25266</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di calcio diidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>Umidificatore ad ultrasuoni</td><td>MediHeim</td><td>MH-2800</td><td>Attrezzatura modificata, Velocità massima spruzzata: 250 ml/ora</td></tr><tr><td>Filtro a rete in nylon idrofilico, 180 &mu; m</td><td>EMD Millipore</td><td>NY8H04700</td><td></td></tr><tr><td>Stampo</td><td></td><td></td> in policarbonato <td>Stampo personalizzato per la fabbricazione di un modello di telaio PDMS</td></tr></tbody></table>

costruzione di fogli modulare idrogel per micropatterned macro-scala 3d cellular architettura

Construction of Modular Hydrogel Sheets for Micropatterned Macro-scaled 3D Cellular Architecture

Idrogel possono essere modellati in micro-scala utilizzando tecnologie microfluidica o micropatterning di fornire un vivo like geometria tridimensionale dei tessuti (3D) in. I risultanti costrutti cellulari in 3D basato idrogel-sono stati introdotti come alternativa agli esperimenti sugli animali per studi biologici avanzati, saggi farmacologici e applicazioni trapianto di organi. Sebbene particelle, fibre a base di idrogel-possono essere facilmente realizzati, è difficile da manipolare loro per la ricostruzione del tessuto. In questo video, si descrive un metodo di fabbricazione dei fogli di idrogel alginato micropatterned, insieme al loro assemblaggio per formare un sistema di coltura cellulare 3D macro scala con un microambiente cellulare controllata. Utilizzando una forma di nebbia dell&#39;agente gelificante calcio, fogli sottili idrogel si generino facilmente con uno spessore dell&#39;ordine di 100 - 200 micron, e con microdisegni precise. Le cellule possono essere coltivate con la guida geometrica dei fogli in idrogelcondizioni freestanding. Inoltre, i fogli idrogel possono essere facilmente manipolati utilizzando una micropipetta con una punta fine-cut, e possono essere assemblati in strutture multistrato mediante sovrapposizione utilizzando un polidimetilsilossano modellata (PDMS) frame. Questi fogli idrogel modulari, che possono essere fabbricati con un processo facile, hanno potenziali applicazioni di test in vitro droga e di studi biologici, compresi studi funzionali di micro e macrostruttura e ricostruzione dei tessuti.

Abbiamo descritto la fabbricazione e la manipolazione di fogli di idrogel freestanding cellulari. Come mostrato in figura 1, abbiamo inventato PDMS micropatterned stampi, e idrogel contenenti cellule è stato caricato sulla superficie idrofila di questi stampi e reticolato utilizzando un umidificatore per generare una nebbia aerosol di agente gelificante. Dopo il rilascio dagli stampi, cellule HepG2 sono state coltivate in autoportante fogli idrogel con vari modelli <stro...

Descriviamo la fabbricazione di fogli di idrogel micromodellati utilizzando un processo semplice, che può essere assemblato e manipolato in una forma indipendente. Utilizzando questi fogli modulari di idrogel, è possibile generare un semplice sistema di coltura cellulare 3D su macroscala con un microambiente cellulare controllato.

Costruzione di fogli modulare idrogel per micropatterned macro-scala 3D Cellular Architettura

Hydrogels can be patterned at the micro-scale using microfluidic or micropatterning technologies to provide an in vivo-like three-dimensional (3D) tissue ...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare la fabbricazione semplice, la manipolazione e l'assemblaggio di fogli modulari di idrogel per un sistema di coltura cellulare 3D. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo dell'ingegneria tissutale, come ad esempio come creare tessuti ingegnerizzati funzionali più simili a quelli in vivo mediante microambienti colturali. Il principale vantaggio di questa tecnica è che costrutti cellulari in idrogel possono essere generati senza alcun incremento costoso.Le condizioni di coltura cellulare 3D dipenderanno da ciascun foglio modulare di idrogel. Le implicazioni di questa tecnica si estendono a saggi basati su cellule e studi biologici migliorati, poiché la tecnica può fornire varie geometrie e composizioni di micro- e macro-ambienti cellulari tridimensionali. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sui saggi in vitro basati su cellule, può essere applicato anche a un altro sistema, come lo scaffold trapiantabile di un modello di tessuto 3D.Iniziare producendo i modelli su microscala desiderati utilizzando tecniche standard di fotolitografia. L'esempio mostrato in questo video utilizzerà un modello a rete simile a un lobulo epatico come quello mostrato qui. Successivamente, pesare 2,5 grammi di PDMS e 2,5 grammi della soluzione dell'agente indurente e mescolare accuratamente i componenti.De-gasare la soluzione in una camera a vuoto, quindi distribuire uniformemente la soluzione mescolata sulla superficie micropatterningata della wafer di silicio all'interno di una capsula in foglio di alluminio. Successivamente, polimerizzare il PDMS ponendo la capsula su una piastra riscaldata a 65 gradi Celsius per 90 minuti. Una volta polimerizzato, rimuovere il PDMS dalla capsula e staccarlo con attenzione dalla wafer di silicio.Rimuovere i bordi del PDMS e posizionare la parte con il micropattern su una piastra di Petri di diametro 100 millimetri in modo che il lato con il micropattern sia rivolto verso l'alto. Successivamente, lavare il PDMS con micropattern con etanolo al 70%, seguito da acqua distillata, per una sterilizzazione primaria. In seguito, asciugare completamente il campione per 10 minuti in forno a 65 gradi Celsius.Successivamente, posizionare il film di PDMS con micropattern in un apparecchio per la pulizia al plasma e pulirlo per un minuto al fine di creare una superficie idrofila. Questo agevolerà il caricamento di liquidi acquosi. Quindi, ricoprire la superficie del PDMS con 100 millilitri della soluzione di tensioattivo elencata nella Tabella dei Materiali.Incubare i campioni su un agitatore da laboratorio per almeno tre ore. Successivamente, lavare la soluzione tensioattiva dai modelli in PDMS utilizzando acqua sterile ed essiccarli completamente in stufa a 65 gradi Celsius per 10 minuti. Quindi, sterilizzare ogni modello micropatterning esponendolo a radiazione ultravioletta per 30 minuti.Iniziare coltivando cellule HepG2 utilizzando tecniche standard. Quando le cellule raggiungono una confluenza del 70%-80%, lavarle una volta con PBS. Successivamente, raccogliere le cellule aggiungendo un millilitro di tripsina al 0,5% con EDTA e incubandole per quattro minuti a 37 gradi Celsius.Dopo il distacco, raccogliere le cellule in un tubo da centrifuga e formare il pellet a 250 g per tre minuti. Rimuovere il soprannatante e quindi risospendere le cellule in un millilitro di PBS. Contare il numero di cellule singole distribuite in PBS utilizzando un contatore cellulare automatico.Quindi, centrifugare nuovamente le cellule a 250 g per tre minuti. Rimuovere il soprannatante di PBS e aggiungere alle cellule una quantità sufficiente di soluzione di alginato di sodio all'uno percento in modo che la densità finale di semina sia compresa tra cinque e dieci milioni di cellule per millilitro. Mescolare delicatamente la soluzione cellulare utilizzando una pipetta, quindi incubare la sospensione di idrogel cellulare in un incubatore umidificato con anidride carbonica al cinque percento a 37 gradi Celsius.Mentre le cellule incubano, posizionare gli stampi in PDMS micropatterningati in un apparecchio per la pulizia al plasma e pulirli per un minuto a 85 watt per creare una superficie idrofila. Mescolare la sospensione di idrogel cellulare aspirando e dispensando delicatamente con una pipetta, quindi caricare stabilmente 7,2 microlitri della sospensione lungo il bordo del micropattern nello stampo. Successivamente, far gelificare la sospensione di idrogel cellulare generando una nebbia del reagente di reticolazione mediante l'umidificatore a una velocità di 250 millilitri all'ora, spruzzandola sul precursore dell'idrogel per cinque minuti.Assicurarsi che questa procedura copra la superficie topografica dello stampo in PDMS entro un raggio di cinque centimetri. Al termine del processo di reticolazione, spegnere l'umidificatore e riempire lo stampo in PDMS con PBS. Utilizzando una pipetta da 200 microlitri, distribuire delicatamente il PBS lungo il bordo dei fogli di idrogel induriti per staccare ciascun idrogel.Quindi, prelevare ciascun foglio di idrogel galleggiante utilizzando una punta di pipetta da 1.000 microlitri con estremità tagliata. Trasferire ogni foglio di idrogel in pozzetti separati di una piastra a 12 pozzetti contenente un millilitro di DMEM preriscaldato, in modo che galleggino sulla superficie del mezzo. Coltivare le cellule in queste condizioni per una settimana, sostituendo il mezzo di coltura ogni due giorni.Successivamente, produrre una struttura in PDMS, che presenta delle strutture a pilastro alte 170 micron sulla superficie inferiore, come descritto nel protocollo di testo allegato. Durante la fabbricazione, posizionare uno stampo in policarbonato specializzato sul wafer di silicio per creare una struttura interna in PDMS con una larghezza di otto millimetri, un'altezza di nove millimetri e una profondità di due millimetri. Una volta sterilizzata, posizionare la struttura in PDMS su un quarto di un foglio di carta filtrante in nylon disposto in una piastra di Petri da 60 millimetri.Rimuovere i fogli di idrogel dall'incubatrice e trasferire il primo dei fogli di idrogel modulare all'interno della struttura in PDMS utilizzando una punta di pipetta da 1.000 microlitri con estremità tagliata. Allineare il bordo del foglio di idrogel modulare con la struttura in PDMS utilizzando una punta di pipetta da 200 microlitri vuota. Ripetere questo procedimento con ulteriori fogli di idrogel fino a ottenere una pila di quattro-sei strati.Successivamente, rimuovere il mezzo di coltura facendolo passare attraverso le strutture a pilastro nella parte inferiore della cornice in PDMS. Quindi, aggiungere due microlitri di una soluzione di alginato al due percento in un angolo della struttura multistrato. Utilizzando un umidificatore, nebulizzare un aerosol del reagente di reticolazione alla velocità di 250 millilitri all'ora sulla struttura multistrato per trenta secondi per unire tra loro i bordi di ciascuno strato.Quindi, risciacquare delicatamente il costrutto multistrato con 400 microlitri di DMEM ed eliminare il telaio in PDMS utilizzando una pinzetta. Successivamente, aggiungere ulteriori quattro millilitri di DMEM. Staccare il costrutto multistrato insieme alla carta filtrante passando delicatamente con un cell lifter, quindi utilizzare la carta filtrante per trasferirlo in una piastra a sei pozzetti contenente tre millilitri di DMEM.Coltivare le cellule in sospensione con una costrutto di idrogel come impalcatura cellulare multiscala in una piastra a sei pozzetti per almeno una settimana. Cambiare il mezzo di coltura ogni due giorni. Qui viene mostrato il risultato dell'assemblaggio strato dopo strato di fogli di idrogel micropatternerizzati simili a lobuli epatici, in cui cellule di carcinoma epatico umano che fluorescono in verde e fibroblasti NIH-3T3 che fluorescono in rosso sono stati coltivati insieme in co-coltura su una maglia combinata.Utilizzando la tecnica qui presentata, è possibile creare numerose variazioni di schemi, inclusi pilastri esagonali, reti sottili, interi array e microfibre multiple a forma di pettine, sotto forma di un sottile costrutto di idrogel dell'ordine di 100-200 micrometri. Queste strutture forniscono un ricco ambiente tridimensionale per la coltura di molti tipi cellulari diversi. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come creare fogli cellulari di idrogel per ingegnerizzare sistemi di coltura tridimensionali simili a quelli in vivo, partendo dal basso verso l'alto.

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