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DOI: 10.3791/54157-v
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Dettagli Questo protocollo i passi importanti necessari per la bioconjugation di un cisteina contenente proteine per un maleimmide, tra cui la purificazione dei reagenti, condizioni di reazione, di purificazione e caratterizzazione bioconjugate bioconjugate.
L'obiettivo generale della sintesi di bioconiugati proteici tramite la chimica cisteina-maleimmide è quello di garantire la specificità nel sito di modifica sulla proteina. Che a sua volta influisce sull'attività del bioconiugato risultante, ad esempio i coniugati anticorpali-farmaci. Se sei interessato alla struttura o alla funzione delle proteine e fai ricerca in nanomedicina, microscopia a fluorescenza o chimica dei sistemi, questa tecnica ti aiuterà a rispondere alle tue domande.
Il vantaggio principale di questa tecnica è che è altamente specifica e ad alto rendimento in più condizioni. Per iniziare questa procedura, sciogliere 12 milligrammi di citocromo C liofilizzato in sei millilitri di tampone fosfato 20 millimolare. Pipettare 16 microlitri di soluzione DTT molare appena preparata nella soluzione proteica per ridurre il citocromo C.Dopo aver miscelato la soluzione, filtrarla attraverso un filtro per siringa PBDF a basso legame proteico da 0,22 micron prima di iniettarla su qualsiasi mezzo cromotografico.
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