Name: Indagini su GA (III) Complesso di EOB-DTPA e la sua 68 Ga marcata radioattivamente analogico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Scopri la sintesi del complesso Ga(III)-EOB-DTPA e la marcatura radioattiva con gallio-68 per l'imaging molecolare. Questo metodo valuta efficienza di marcatura, stabilità in vitro e coefficiente di distribuzione n-ottanolo/acqua.

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1. Preparazione di EOB-DTPA e Ga [EOB-DTPA] Attenzione: Si prega di consultare tutte le schede di sicurezza materiale pertinente (MSDS) dei macchinari usati solventi organici, acidi e alcali prima dell&#39;uso. Eseguire tutti i passaggi in una cappa aspirante e utilizzare dispositivi di protezione individuale (occhiali, guanti, camice da laboratorio). <ol><li> Isolamento di EOB-DTPA da acido gadoxetico <ol><li> Mettere 3 ml di 0,25 M soluzione iniettabile gadoxetico acido in un pallone. Aggiungere 500 mg (5,6 mmol) di acido ossalico alla soluzione agitata. </li><li> Dopo agitazione per 1 ora, filtrare la sospensione attraverso una fritta con pressione ridotta. Lavare il residuo tre volte con 3 ml di acqua, rispettivamente. </li><li> Unire i filtrati acquosi e dotare la soluzione con un elettrodo di pH. Aggiungere 12 M di acido cloridrico al filtrato finché il pH è circa -0.1. </li><li> Rimuovere il solvente sotto vuoto ottenendo un residuo incolore. Conservare sotto gas inerte. </li><li> Lavare accuratamente il residuo (almeno trevolte) con acetato di etile per rimuovere l&#39;eccesso di acido ossalico. Essiccare il residuo sotto vuoto. </li><li> Riprendere il residuo in 2 ml di acqua a temperatura ambiente e poi raffreddare la soluzione in un bagno di ghiaccio. Senza rimuovere il bagno di ghiaccio, si aggiungono 0,5 M di idrossido di sodio acquoso soluzione goccia a goccia fino alla formazione di un incolore collosa solido viene osservato. </li><li> Rimuovere l&#39;acqua per decantazione. Lavare i solidi altre due volte con 1 ml di acqua fredda. Essiccare il solido sotto vuoto ottenendo la prima frazione di prodotto. </li><li> Isolare una seconda frazione del prodotto dalle frazioni combinate di acqua decantata tramite cromatografia su colonna (silice, metanolo / acqua 4/1). 24 Rimuovere il solvente sotto vuoto. </li><li> Se il solido così ottenuto non è bianco puro, scioglierla in 1 ml di acqua, aggiungere 10 ml di etanolo e successivamente 10 ml di etere etilico per far precipitare il prodotto. Filtrare attraverso una fritta con pressione ridotta e secco sotto vuoto. </li><li> combinareentrambe le frazioni solide di EOB-DTPA ed eseguire spettroscopica NMR, 25 spettrometria di massa 26 e 27 elementari analisi. </li></ol></li><li> Sintesi di Ga [EOB-DTPA] ATTENZIONE: solido Ga (III) cloruro Conservare in atmosfera inerte, secco, dal momento che al contatto con l&#39;aria, l&#39;umidità o la decomposizione di grasso si svolge, con conseguente fumi corrosivi e la formazione di impurità giallo, marrone o nero. <ol><li> Preparare una soluzione 0,11 M magazzino sciogliendo 1,94 g (11,0 mmoli) di Ga (III) cloruro in 100 ml di acqua. Diluire 1 ml di 25% soluzione acquosa ammoniacale con 4 ml di acqua. </li><li> Sciogliere 80 mg (0,15 mmoli) di EOB-DTPA in un pallone a 10 ml di acqua. Se necessario, riscaldare il solvente per ottenere la completa dissoluzione. </li><li> Aggiungere 1,4 ml (0,15 mmol) del Ga (III) cloruro soluzione madre. Dotare il pallone con un agitatore e pH-elettrodo. Aggiungere diluita soluzione acquosa di ammoniaca goccia a goccia fino a che il pH della soluzione è circa 4,1. Mescolare a rotemperatura om per 30 min. </li><li> Rimuovere il solvente sotto vuoto. Posizionare il residuo in un pallone munito di un stillhead con un collo lato centrale e parallelo. Dotare collo centrale con un dito di raffreddamento e il collo laterale con una presa di pompa da vuoto </li><li> Riscaldare il residuo a pressione ridotta (125 ° C, 0,6 mbar). Periodicamente rimuovere il cloruro di ammonio sublimata (visibile come rivestimento bianco della superficie di vetro) dal dito di raffreddamento ed ancora testa, nonché dalle parti superiori del pallone con un panno leggermente bagnato. Continuare il processo fino a quando non vi è alcuna formazione visibile di nuovo sublimato. </li><li> Per rimuovere le ultime tracce di cloruro di ammonio lavare il residuo tre volte con 0,5 ml di metanolo caldo, rispettivamente. Essiccare il residuo incolore sotto vuoto. Eseguire NMR spettroscopica, 25 di massa spettrometria di 26 e 27 elementari analisi. </li></ol></li></ol> 2. Procedura generale Labeling ATTENZIONE: tutti gli exesperi- compreso il contatto diretto o indiretto con le sostanze radioattive devono essere effettuate solo da personale qualificato. Si prega di utilizzare apparecchiature schermatura appropriata. Raccogliere tutte le scorie radioattive a parte e conservare e smaltire secondo le norme vigenti. <ol><li> Eluizione del generatore Nota: A 40 mCi 68 Ge / 68 Ga generatore con il nuclide madre vincolati come ossido di silice dodecil-3,4,5-trihydroxybenzoate è stato utilizzato. Elution e purificazione possono essere eseguite manualmente o, come nel caso in questa procedura, come un processo automatizzato combinati utilizzando una pompa peristaltica e dispositivo erogatore. <ol><li> Preparare soluzioni di 5,5 M, 1,0 M e 0,05 M di acido cloridrico. Preparare una soluzione di 5,0 M di cloruro di sodio contenente 25 ml di 5,5 M di acido cloridrico per ml. Preparare una soluzione tampone a pH 4,6 combinando 4,1 g di acetato di sodio, 1 ml di HCl (30%) e 2,5 ml di acido acetico glaciale e diluendo la miscela con acqua a 50 ml. </li><li> precondition PS-H + cartuccia lavaggio lentamente con 1 ml di 1,0 M di acido cloridrico e poi 5 ml di acqua. </li><li> Eluire la colonna di silice del generatore con 4 ml di 0,05 M HCl. 12 Caricare il 68 Ga eluato sulla PS-H + cartuccia. </li><li> Lavare la cartuccia con 5 ml di acqua e successivamente asciugare con 5 ml di aria. Eluire il 68 Ga dalla cartuccia con 1 ml 5.0 M acidificato soluzione di cloruro di sodio. 28 </li></ol></li><li> Etichettatura di EOB-DTPA con 68 Ga <ol><li> Sciogliere 1 mg (1,9 mmol) di EOB-DTPA in 1 ml di acqua. Da questa soluzione prendere 100 ml (0,19 mmol) e diluire con 9,9 ml di acqua per preparare un 19 micron (10 mg / ml) soluzione madre di EOB-DTPA. </li><li> Rimuovere 50 ml (pari 22-29 MBq) della soluzione contenente 68 Ga e messi in una fiala. Aggiungere 50 ml (0,5 mg) di mm soluzione stock di EOB-DTPA 19 e 300 ml of tampone per aumentare il pH a 4,0. Agitare brevemente e incubare la soluzione a temperatura ambiente per 5 min. Rimuovere una aliquota di 1-5 ml e mettere a un&#39;analisi HPLC o TLC. </li><li> Eseguire l&#39;analisi HPLC la radio su una fase inversa (RP) C18 colonna 29 Utilizzare la seguente fase mobile:. A - acqua / acido trifluoroacetico (99,9% / 0,1%), B - Acido acetonitrile / trifluoroacetico (99,9% / 0,1%), pendenza : 06 min 80% A → 0% A (0,5 ml / min), 610 min 0% A (0,5 ml / min). </li><li> Determinare l&#39;intensità dei picchi dei segnali radio HPLC come area sotto la curva. Calcolare la resa di etichettatura radiochimica purezza (RCP) del tracciante come segue: RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A + A Ga Ga-EOB-DTPA) ∙ 100% Un Ga-EOB-DTPA: area sotto la curva di 68 Ga [EOB-DTPA] A Ga: area sotto la curva del libero 68 Ga </li></ol></li></ol> 3. etichettatura dell&#39;efficienza <ol><li> Eseguire procedure di etichettatura come descrittod nella sezione 2. Utilizzare una serie coerente di avviare l&#39;attività di 68 Ga eluato, ad esempio, 22-29 MBq (40-140 ml, a seconda della freschezza del eluato). </li><li> Aggiungere la quantità richiesta di soluzione tampone per regolare il pH a 3,8-4,0 (40-190 microlitri, a seconda del volume di 68 Ga eluato). Aggiungere la quantità richiesta di soluzione di legante magazzino (10-70 ml di una soluzione di 19 mm). </li><li> Aggiungere la quantità necessaria di acqua per regolare il volume complessivo di ogni sonda etichettatura a 1,75 ml. Mescolare accuratamente e lasciare riposare il campione per 5 minuti a temperatura ambiente. Effettuare analisi HPLC come descritto al punto 2 per determinare la resa di etichettatura. </li><li> Eseguire le procedure di etichettatura con quantità di legante tra 0,1 mg e 0,7 mg a passi di 0,1 mg. Effettuare esperimenti in triplicato per ciascuna concentrazione ligando. Calcolare la resa media e deviazione standard. </li></ol> 4. In Vitro stabilità <ol><li> p GeneraleROCEDURA e preparati <ol><li> Sciogliere una compressa di tampone fosfato salino (PBS) in 200 ml di acqua deionizzata per preparare una soluzione madre PBS con una concentrazione di fosfato 10 mM. </li><li> Eseguire etichettatura di 22-29 MBq 68 Ga con 0,5 ml di soluzione stock EOB-DTPA, come descritto nella sezione 2. A seconda del volume del 68 Ga eluato, regolare la quantità di tampone, come descritto nella sezione 3. Prelevare campioni di soluzione di etichettatura contenente 6-12 MBq di tracciante per eseguire misure di stabilità. </li><li> Eseguire la radio analisi TLC su piastre di alluminio 80 mm di gel di silice rivestite con 0,1 M citrato di sodio acquoso come eluente e analizzare le piastre con uno scanner radioattività TLC. 30 Determinare le intensità dei segnali TLC come area sotto la curva. Calcolare la RCP del tracciante come segue: RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A-Ga libero + A Ga-EOB-DTPA + A Ga-colloidale) ∙ 100% Un Ga-EOB-DTPA: area sotto la curva di 68 Ga [EOB-DTPA] Un Ga-libera: area sotto la curva del libero 68 Ga Un Ga-colloidale: area sotto la curva di colloidale 68 Ga </li><li> Calcolare RCP t / RCP 0 per ogni punto di tempo. Tracciare la RCP in tal modo standardizzato rispetto differenza di tempo da quando il punto di partenza t = 0 min. RCP t = RCP di 68 Ga [EOB-DTPA] al punto di tempo t. RCP = 0 RCP di 68 Ga [EOB-DTPA] al tempo t = 0 min. </li></ol></li><li> Stabilità in tampone fosfato (A) <ol><li> Per 65 ml di soluzione di etichettatura aggiungere 150 ml di soluzione madre PBS e 60 ml di soluzione di idrossido di sodio (0,1 M) per sollevare il pH a 7,4. Mescolare accuratamente. </li><li> Rimuovere una aliquota di 1-5 microlitri per effettuare analisi TLC ( &#39;punto di partenza&#39;). memorizzare immediatamente la soluzione in un incubatore a 37 ° C e rimuovere aliquote di effettuare analisi TLC a rappresentareative punti di tempo più di 3 ore. </li></ol></li><li> Stabilità verso eccesso di apo -transferrin in PBS (B) <ol><li> Per 120 ml di soluzione di etichettatura aggiungere 50 ml di soluzione madre PBS e 430 ml di soluzione di idrossido di sodio (0,1 M) per sollevare il pH a 7,4. Aggiungere 40 ml di una soluzione di apo -transferrin (25 mg / ml). Mescolare accuratamente. </li><li> Rimuovere una aliquota di 1-5 microlitri per effettuare analisi TLC ( &#39;punto di partenza&#39;). memorizzare immediatamente la soluzione in un incubatore a 37 ° C e rimuovere aliquote di effettuare analisi TLC in punti temporali rappresentativi oltre 3 ore. </li></ol></li><li> Stabilità in siero umano (C) <ol><li> Per 500 ml di siero umano aggiungere 25 ml di soluzione di etichettatura e 45 ml di soluzione di idrossido di sodio (0,1 M) per sollevare il pH a 7,4. Mescolare accuratamente. </li><li> Rimuovere una aliquota di 1-5 microlitri per effettuare analisi TLC ( &#39;punto di partenza&#39;). memorizzare immediatamente la soluzione in un incuBator a 37 ° C e rimuovere aliquote di eseguire analisi TLC in momenti rappresentativi di oltre 3 ore. </li></ol></li></ol> 5. Determinazione del coefficiente di ripartizione LoGD <ol><li> Eseguire procedure di etichettatura, come descritto nella sezione 2. Per 50 ml di soluzione di etichettatura aggiungere 20 ml di soluzione madre PBS e 170 ml di soluzione di idrossido di sodio (0,1 M) per sollevare il pH a 7,4. </li><li> Prelevare 200 ml di questa soluzione e metterla in una plastica V-fiala. Aggiungere 200 ml di n-ottanolo. Chiudere la fiala e vortex per 2 min. Poi centrifugare il campione a 1.600 xg per 5 min. </li><li> Rimuovere triplicato da 40 ml dalla fase n n-octanolo e la fase acquosa ogni e metterli in V-flaconcini separati. Fare attenzione a non mischiare gli strati. </li><li> Misurare l&#39;attività di ciascun campione in un contatore gamma bene per 30 sec. Per ogni campione ripetere la misurazione immediatamente due volte e ne calcola la media dell&#39;attività Ᾱ t </sub&gt; in conteggi per minuto (cpm). Elencare il Ᾱ t così guadagnato, W1, Ᾱ t, W2 e Ᾱ t, W3 (attività in campioni acquosi) e Ᾱ t, O1, Ᾱ t, O2, Ᾱ t, O3 (attività in n- ottanolo) insieme con il rispettivo punto t momento della loro determinazione. </li><li> Definire il punto di tempo della misurazione dell&#39;ultimo campione come t 0. Determinare ed elencare Dt in min calcolando At = TT 0. Eseguire la correzione di decadimento Ᾱ t, utilizzando la seguente formula: Ᾱ 0 = Ᾱ t · 2 (Dt / 68 min). </li><li> Calcolare Ᾱ 0, W come media di Ᾱ 0, W1, Ᾱ 0, W2 e Ᾱ 0, W3 e Ᾱ 0, O come media di Ᾱ 0, O1, Ᾱ 0, O2 e Ᾱ 0, O3. Calcolare LoGD utilizzando la seguente formula: LoGD = log [(Ᾱ <sub&gt; 0, O · 40 mcg) / (Ᾱ 0, W · 33 mg)]. </li><li> Eseguire l&#39;intero esperimento in triplicato e calcolare la media LoGD insieme con la sua deviazione standard. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

EOB-DTPA è accessibile attraverso una sintesi multi-step 33, ma può benissimo essere isolato dagli agenti di contrasto disponibili contenenti acido gadoxetico. Per questo scopo, lo ione centrale di Gd (III) può essere precipitato con un eccesso di acido ossalico. Dopo aver rimosso Gd ossalato (III) e acido ossalico il legante può essere isolato mediante precipitazione in acqua fredda a pH 1.5. Tuttavia, al fine di migliorare le rese colonna cromatografica del filtrato può essere eseguita preferibilmente o com...

Acido gadoxetico, un nome comune per il complesso di Gd (III) del ligando EOB-DTPA 1, è un agente di contrasto utilizzato frequentemente nell&#39;imaging epatobiliare risonanza magnetica (MRI). 2,3 Grazie al suo assorbimento specifico epatociti del fegato e un&#39;alta percentuale di escrezione epatobiliare consente la localizzazione di lesioni focali e tumori epatici. 2-5 Tuttavia, alcune limitazioni della tecnica MRI (ad esempio, tossicità dei mezzi di contrasto, limitata applicabilità nei pazienti con impianti claustrofobia o metallo) richiedono uno strumento diagnostico alternativa . Tomografia ad emissione di positroni (PET) è un metodo di imaging molecolare, in cui viene somministrata una piccola quantità di una sostanza radioattiva (tracciante), su cui la sua distribuzione nel corpo è registrato da uno scanner PET. 6 PET è un metodo dinamico che consente per alta risoluzione spaziale e temporale delle immagini così come quantificazione dei risultati, senza doveraffrontare gli effetti collaterali degli agenti di contrasto per MRI. Il valore informativo delle informazioni metaboliche ottenuto può essere ulteriormente aumentata combinazione con dati anatomici ricevuti da metodi di imaging addizionali, come più comunemente realizzato da immagini ibrida con la tomografia computerizzata (CT) in scanner PET / CT. La struttura chimica di un tracciante adatto per PET deve includere un isotopo radioattivo che funge da emettitore positroni. Positroni hanno una breve durata in quanto si annichilano quasi immediatamente con gli elettroni dei gusci atomo di tessuto circostante. Con annientamento due fotoni gamma 511 keV con direzione opposta del movimento sono emessi, che sono registrati dallo scanner PET. 7,8 Per formare un tracciante, nuclidi PET possono essere legati covalentemente ad una molecola, come avviene in 2-deoxy- 2- [18 F] fluoroglucose (FDG), il PET tracciante più ampiamente utilizzato. 7 Tuttavia, un nuclide può anche formare legami di coordinazione a uno o più leganti (ad esempio, [68 Ga] -DOTATOC 9,10) o essere applicato come sali inorganici disciolti (ad esempio, [18 F] sodio fluoruro 11). Complessivamente, la struttura del tracciante è fondamentale in quanto determina il comportamento biodistribuzione, metabolismo ed escrezione. Un adatto nuclide PET deve combinare caratteristiche favorevoli come conveniente energia positrone e disponibilità così come un&#39;emivita adeguata per l&#39;indagine previsto. Il 68 Ga nuclide è diventata una forza essenziale nel campo della PET negli ultimi due decenni. 12,13 Ciò è dovuto principalmente alla sua disponibilità attraverso un sistema di generatore, che permette etichettatura sul posto indipendentemente dalle vicinanze di un ciclotrone. In un generatore, la madre nuclide 68 Ge viene assorbito su una colonna da cui figlia nuclide 68 Ga viene eluito e successivamente etichettata per un chelante adeguato. 6,14 Poiché il 68 Ga nuclide esiste come trivalent cazione proprio come Gd (III) 10,13, chelanti EOB-DTPA con 68 Ga invece produrrebbe un complesso con la stessa carica negativa complessiva come acido gadoxetico. Di conseguenza, che il 68 Ga tracciante potrebbe combinare una caratteristica simile specificità del fegato con l&#39;idoneità per l&#39;imaging PET. Sebbene l&#39;acido gadoxetico viene acquistato e somministrato come sale disodico, nel contesto seguente si farà riferimento ad esso come Gd [EOB-DTPA] e dal complesso non radioattivo Ga (III) come Ga [EOB-DTPA], o 68 Ga [ EOB-DTPA] nel caso della componente radiomarcato per motivi di convenienza. Per valutare la loro applicabilità come traccianti per PET, complessi metallici radioattivi devono essere esaminate estesamente in vitro, in vivo o ex vivo esperimenti prima. Per determinare l&#39;idoneità per un rispettivo problema medico, varie caratteristiche traccianti come comportamento biodistribuzione e profilo di liquidazione, la stabilità, la specificità degli organi e delle cellule o Tissue l&#39;assorbimento bisogno di essere indagato. A causa del loro carattere non invasivo, le determinazioni in vitro sono spesso eseguiti prima di esperimenti in vivo. È generalmente riconosciuto che DTPA e suoi derivati ​​sono limitatamente idonee come chelanti per 68 Ga causa di questi complessi privi inerzia cinetica, con conseguente decomposizione comparabilmente veloce quando somministrati in vivo. 14-20 Questo è principalmente causata da apo transferrina fungendo da concorrente per 68 Ga nel plasma. Tuttavia, abbiamo studiato questo nuovo tracciante per quanto riguarda la sua possibile applicazione nel campo dell&#39;imaging epatobiliare, in cui le informazioni di diagnostica possono essere fornite in pochi minuti dopo l&#39;iniezione 3,4,21-23, quindi non necessariamente richiedono stabilità tracciante a lungo termine. A questo scopo abbiamo isolato EOB-DTPA da acido gadoxetico e inizialmente eseguito la complessazione con Ga naturale (III), che esiste come miscela di due isotopi stabili, 69 Ga e 71 </sup&gt; Ga. Il complesso così ottenuto servito come campione non radioattivo per il seguente chelazione del 68 Ga. Abbiamo usato stabilito metodi e contemporaneamente valutato la loro idoneità per determinare l&#39;efficienza 68 Galabeling di EOB-DTPA e di indagare la lipofilia della nuova 68 Ga tracciante e la sua stabilità in diversi media.

<table><tbody><tr><td>primovista</td><td></td> Bayer-0,25 <td></td><td>M</td></tr><tr><td>cloruro di gallio(III)</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td></td><td></td>450898</tr><tr><td>acqua (deionizzata)</td><td>-</td><td>-</td><td>apparecchiature per la deionizzazione dell'acqua di rubinetto di Auma-Tec GmbH</td></tr><tr><td>acido cloridrico 12 M</td><td>VWR</td><td>20252.29</td><td></td></tr><tr><td>idrossido di sodio</td><td>Polskie Odczynniki Chemiczne S.A.</td><td></td><td></td>810925429</tr><tr><td>acido ossalico</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>75688</td><td></td></tr><tr><td>acetato di etile</td><td>Brenntag GmbH</td><td>10010447</td><td></td></tr><tr><td>gel di silice</td><td>Merck KGaA</td><td>1.10832.9025</td><td>Geduran Si 60 0.063-0.2&nbsp; mm</td></tr><tr><td>TLC gel di silice 60 F254</td><td>Merck KGaA</td><td>1.16834.0001</td><td></td></tr><tr><td>metanolo</td><td>VWR</td><td>20903.55</td><td></td></tr><tr><td>etanolo</td><td>Brenntag GmbH</td><td>10018366</td><td></td></tr><tr><td>eietiletere</td><td>VWR</td><td>23807.468</td><td>conservato su piastre KOH</td></tr><tr><td>soluzione di ammoniaca (25%)</td><td>VWR</td><td>1133.1</td><td></td></tr><tr><td>elettrodo pH</td><td>VWR</td><td>662-1657</td><td></td></tr><tr><td>unità di agitazione e riscaldamento</td><td>Heidolph</td><td>505-20000-00</td><td></td></tr><tr><td>pompa</td><td>Ilmvac GmbH</td><td>322002</td><td></td></tr><tr><td>fritta-design</td><td></td><td></td><td></td> personalizzato</tr><tr><td>spettrometro NMR</td><td>Bruker Coorporation-Ultra</td><td></td> <td>Shield 400</td></tr><tr><td>spettrometro di massa</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>analizzatore elementare</td><td>Hekatech GmbH Analysentechnik-EuroVector</td><td></td> <td>EA 3000 CHNS</td></tr><tr><td>acqua deuterata D2O</td><td>euriso-top</td><td>D214</td><td>99.90% D</td></tr><tr><td colspan="4">Materiale/Attrezzatura necessaria per le procedure di etichettatura</td></tr><tr><td>68Ge/68Ga</td><td>ITG Isotope Technologies Garching GmbH</td><td>A150</td><td></td></tr><tr><td>sistema di pompe ed erogatori</td><td>Scintomics</td> <td>GmbH-Variosystem</td><td></td></tr> <tr><td>acido cloridrico 30% (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00318.1000</td><td></td></tr><tr><td>acqua (ultrapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.01262.1000</td><td></td></tr><tr><td>cloruro di sodio (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.06406.0500</td><td></td></tr><tr><td>acetato di sodio (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.06264.0050</td><td></td></tr><tr><td>acido acetico glaciale (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00066.0250</td><td></td></tr><tr><td>citrato di sodio diidrato</td><td>VEB Laborchemie Apolda</td><td>10782</td><td>>98,5%</td></tr><tr><td>PS-H+ Cartuccia (S)</td><td>Macherey-Nagel</td><td>731867</td><td>Chromafix</td></tr><tr><td>apo-Transferrin</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>Tampone PBS T2036</td><td></td></tr><tr><td>(compresse)</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>79382</td><td></td></tr><tr><td>siero umano</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>H4522</td> da fiasche <td>di plasma AB maschio umano</td></tr><tr><td>, colonne, ecc.</td><td></td><td>elettrodo pH dal design</td><td></td>personalizzato</tr><tr><td></td><td>Knick Elektronische Messger&auml; te GmbH & Co. KG</td><td>765-Set</td><td></td></tr><tr><td>pompa binaria (HPLC)</td><td>Hewlett-Packard</td><td>G1312A (HP 1100)</td><td></td></tr><tr><td>Rivelatore UV/VIS (HPLC)</td><td>Hewlett-Packard</td><td>G1315A (HP 1100)</td><td></td></tr><tr><td>rivelatore radioattivo (HPLC)</td><td>EGRC Berthold</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC C-18-PFP colonna</td><td>Advanced Chromatography Technologies Ltd.</td><td>ACE-1110-1503/A100528</td><td></td></tr><tr><td>Fiale in vetro HPLC</td><td>GTG Glastechnik Graefenroda GmbH</td><td>8004-HP-H/i3&micro;</td><td></td></tr><tr><td>pipetta</td><td>Eppendorf-fiale</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>di plastica</td><td>Sarstedt AG & Co.</td><td>6542.007</td><td></td></tr><tr><td>fiale di plastica</td><td>Greiner Bio-One International GmbH</td><td>717201</td><td></td></tr><tr><td>activimeter</td><td>MED Nuklear-Medizintechnik Dresden</td><td></td> <td>GmbH-Isomed 2010</td></tr><tr><td>pinzette incubatrice</td><td></td><td>design</td><td></td>personalizzato</tr><tr><td></td><td>Heraeus Instruments GmbH</td><td>51008815</td><td></td></tr><tr><td>miscelatore a vortice</td><td>Fisons-Whirlimixer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuga</td><td>Heraeus Instruments GmbH</td><td>75003360</td><td></td></tr><tr><td>contatore di pozzi gamma</td><td>MED Nuklear-Medizintechnik Dresden</td> <td>GmbH-Isomed</td> <td>2100</td></tr><tr><td>acqua per cromatografia</td><td>Merck KGaA</td><td>1.15333.2500</td><td></td></tr><tr><td>acetonitrile per cromatografia</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00030.2500</td><td></td></tr><tr><td>acido trifluoroacetico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>91707</td><td></td></tr><tr><td>scanner di radioattività TLC</td><td>raytest Isotopenmessger&auml; te GmbH</td><td>B00003875</td><td>dotato di rivelatore di plastica beta</td></tr></tbody></table>

indagini su ga (iii) complesso di eob-dtpa e la sua<sup&gt; 68</sup&gt; ga marcata radioattivamente analogico

Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue

Abbiamo dimostrato un metodo per l&#39;isolamento di EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris (carbossimetil) -4- (etossibenzile) Acido -undecanedioic) dalla sua Gd (III) e protocolli per preparazione del suo romanzo non radioattiva, cioè, naturale Ga (III) così come radioattivo 68 complesso Ga. Il legante, nonche la Ga (III) sono stati caratterizzati mediante spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR), spettrometria di massa e analisi elementare. 68 Ga è stato ottenuto con un metodo eluizione standard da un / 68 generatore 68 Ge Ga. Gli esperimenti per valutare l&#39;efficienza di 68 Ga-etichettatura dei EOB-DTPA a pH sono stati eseguiti 3,8-4,0. tecniche di analisi stabilito la radio TLC (cromatografia su strato sottile) e HPLC della radio (cromatografia liquida ad alte prestazioni) sono stati utilizzati per determinare la purezza radiochimica del tracciante. Come prima indagine di lipofilia 68 Ga traccianti &#39;la ottanolo / acqua distributioCoefficiente di 68 specie Ga presenti in una soluzione a pH 7,4 è stato determinato mediante un metodo di estrazione. In vitro misure di stabilità del tracciante in vari media a pH fisiologico state eseguite, rivelando diversi tassi di decomposizione.

Il ligando EOB-DTPA e Ga non radioattivo (III) sono stati analizzati mediante 1 H e 13 C {1} H spettroscopia NMR, spettrometria di massa e analisi elementare. I risultati riportati in Tabella 1 e rappresentati nelle figure 1-6 verifica la purezza delle sostanze. Eluizione del generatore 68 Ge / 68 Ga ha prodotto soluzioni di 400-6...

Una procedura per l&#39;isolamento di EOB-DTPA e successiva complessazione con Ga naturale (III) e 68 Ga è presentato qui, nonché un&#39;attenta analisi di tutti i composti e ricerche sull&#39;efficienza etichettatura, la stabilità in vitro e l&#39;ottanolo / acqua coefficiente di distribuzione del complesso radiomarcato.

Indagini su GA (III) Complesso di EOB-DTPA e la sua<sup&gt; 68</sup&gt; Ga marcata radioattivamente analogico

We demonstrate a method for the isolation of EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris(carboxymethyl)-4-(ethoxybenzyl)-undecanedioic acid) from its Gd(III) ...

L'obiettivo generale di questa procedura è valutare un nuovo complesso radioattivo del gallio-68 per l'imaging molecolare. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della chimica dei traccianti a base di gallio-68, come le condizioni di marcatura, la stabilità del tracciante e la lipofilicità. La tecnica di marcatura radioattiva è semplice e consente una rapida determinazione dei risultati, richiedendo soltanto quantità minime di materiale.Per iniziare questa procedura, aggiungere tre millilitri di soluzione iniettabile di acido gadoxetico 0,25 molare in un pallone. Quindi aggiungere 500 milligrammi di acido ossalico alla soluzione di acido gadoxetico in agitazione. Dopo aver agitato per un'ora, filtrare la sospensione attraverso un filtro poroso utilizzando una pressione ridotta.Lavare il residuo tre volte con tre millilitri di acqua. Successivamente, unire i filtrati acquosi in un becher e inserire un elettrodo per il pH nella soluzione. Aggiungere acido cloridrico 12 M al filtrato fino a quando il pH raggiunge circa 0,1.Dopo aver rimosso il solvente sotto vuoto, lavare accuratamente il residuo con acetato di etile caldo per rimuovere l'acido ossalico in eccesso. Quindi asciugare il residuo sotto vuoto. Una volta che il residuo è asciutto, ridisciolgerlo in due millilitri di acqua deionizzata e successivamente raffreddare la soluzione in un bagno di ghiaccio.Senza rimuovere il bagno di ghiaccio, aggiungere idrossido di sodio 0,5 molare goccia a goccia fino a quando si osserva un solido incolore e appiccicoso. Successivamente, rimuovere l'acqua con una pipetta. Per preparare una soluzione madre 0,11 molare di tricloruro di gallio, sciogliere 1,94 grammi del solido in 100 millilitri di acqua.Successivamente, sciogliere 80 milligrammi di EOB-DTPA in 10 millilitri di acqua. Se necessario, riscaldare la soluzione per ottenere una completa dissoluzione. Aggiungere 1,4 millilitri della soluzione madre di tricloruro di gallio alla soluzione di EOB-DTPA e inserire un elettrodo pH nel becher.Quindi aggiungere goccia a goccia soluzione acquosa di ammoniaca diluita fino a quando il pH della soluzione è approssimativamente 4,1. Dopo aver rimosso il solvente sotto vuoto, collocare il residuo in un pallone provvisto di testa in acciaio con un collo centrale e un collo laterale parallelo. Equipaggiare il collo centrale con un refrigerante a dito e il collo laterale con un'uscita per pompa a vuoto.Riscaldare il residuo sotto pressione ridotta. Rimuovere periodicamente il cloruro di ammonio sublimato dal pallone con un panno leggermente umido. Condizionare una cartuccia PSH plus lavandola lentamente con 1 millilitro di acido cloridrico 1 molare e successivamente con 5 millilitri di acqua.Successivamente, eluire la colonna di silice del generatore con quattro millilitri di acido cloridrico 0,05 molare e caricare l’eluito di gallio-68 nella cartuccia PSH plus. Lavare la cartuccia con cinque millilitri di acqua. Dopo l’essiccazione con aria, eluire il gallio-68 dalla cartuccia con un millilitro di cloruro di sodio acidificato 5 molare.Ora aggiungere 50 microlitri dell'eluito di gallio-68 e 50 microlitri di una soluzione stock di EOB-DTPA 19 micromolare preparata in precedenza in un vial. Aggiungere 300 microlitri di tampone per innalzare il pH a 4,0. Agitare brevemente e incubare la soluzione a temperatura ambiente per cinque minuti.Trasferire un'aliquote di soluzione da cinque a 20 microlitri in un vial per HPLC. Successivamente, eseguire l'analisi radio-HPLC su una colonna a fase inversa C18. Per eseguire misurazioni di stabilità in vitro, prelevare campioni dalla soluzione di marcatura contenente da sei a 12 megabecquerel di tracciante.Eseguire l'analisi radio-TLC su piastre di alluminio rivestite con gel di silice da 80 millimetri utilizzando citrato di sodio acquoso 0,1 molare come eluente. Analizzare le piastre con uno scanner di radioattività per TLC. Per determinare la stabilità nel soluzione salina tamponata al fosfato, aggiungere 150 microlitri di soluzione madre di PBS 10 millimolare e 60 microlitri di idrossido di sodio 0,1 molare a 65 microlitri di soluzione di marcatura.Mescolare accuratamente la soluzione. Successivamente, trasferire un'aliquota di uno a cinque microlitri della soluzione su una piastra di silice per l'analisi mediante TLC. Conservare immediatamente la soluzione in un incubatore a 37 gradi Celsius.Prelevare aliquote per eseguire l'analisi mediante TLC in punti temporali rappresentativi nell'arco di tre ore. Per determinare la stabilità in presenza di un eccesso di apotransferrina, aggiungere 50 microlitri di soluzione stock di PBS 10 millimolare e 430 microlitri di idrossido di sodio 0,1 molare a 120 microlitri di soluzione di marcatura. Aggiungere 40 microlitri di una soluzione di apotransferrina a 25 milligrammi per millilitro e mescolare accuratamente la soluzione.Successivamente, trasferire un'aliquote di soluzione da uno a cinque microlitri su una piastra di silice per l'analisi mediante TLC. Conservare immediatamente la soluzione in un incubatore a 37 gradi Celsius. Prelevare aliquote per eseguire l'analisi TLC in punti temporali rappresentativi nell'arco di tre ore.Per determinare la stabilità nel siero umano, aggiungere 45 microlitri di idrossido di sodio 0,1 molare e 500 microlitri di siero umano a 25 microlitri di soluzione di marcatura. Dopo aver mescolato accuratamente la soluzione, trasferire un'aliquote di uno a cinque microlitri su una piastra di silice per l'analisi mediante TLC. Conservare immediatamente la soluzione in un'incubatrice a 37 gradi Celsius.Prelevare aliquote per eseguire l'analisi mediante TLC in punti temporali rappresentativi nell'arco di tre ore. Per la determinazione del coefficiente di distribuzione, aggiungere 20 microlitri di soluzione madre di PBS 10 millimolare e 170 microlitri di idrossido di sodio 0,1 molare a 50 microlitri di soluzione di marcatura. Trasferire 200 microlitri della soluzione in un vial di plastica a fondo conico e aggiungere 200 microlitri di n-ottanolo.Chiudere il vial e vortexare per due minuti, quindi centrifugare il campione a 1600 ×g per cinque minuti. Dopo la centrifugazione, prelevare in triplice replicato 40 microlitri dalla fase di n-ottanolo e dalla fase acquosa e trasferirli in vials di plastica a fondo conico separati. Infine, misurare l'attività di ciascun campione con un contatore gamma a pozzo per 30 secondi.L'EOB-DTPA legato e il complesso di gallio tre non radioattivo sono stati analizzati mediante spettroscopia NMR a protone e carbonio, spettrometria di massa e analisi elementare. La procedura di marcatura porta alla formazione del tracciante desiderato, gallio-68 EOB-DTPA, identificato come un picco radio-HPLC con un tempo di ritenzione di 2,8 minuti. Il confronto con il tempo di ritenzione dello standard freddo a 220 nanometri conferma l'avvenuto completamento della marcatura.È stata studiata l'efficienza di marcatura con gallio-68 dell'EOB-DTPA determinando il rendimento di marcatura in funzione della concentrazione del ligando mediante HPLC. Qui viene mostrato un cromatogramma rappresentativo di una piastra TLC analizzata con uno scanner radioattivo per TLC. Per valutare la stabilità del tracciante, la purezza radiochimica nel tempo è stata determinata mediante TLC.La percentuale standardizzata di tracciante integro è rappresentata in funzione del tempo. I valori di attività e il successivo calcolo del coefficiente di distribuzione sono riportati qui. Seguendo questo procedimento, è possibile eseguire altri metodi, come esperimenti in vitro, al fine di rispondere ad ulteriori domande riguardo alla biodistribuzione e alla dinamica dell'assorbimento.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione delle tecniche utilizzate per valutare e analizzare i traccianti al gallio-68 per l'imaging molecolare. Non dimenticare che lavorare con sostanze radioattive può essere dannoso. L'operazione può essere eseguita solo da personale qualificato.Precauzioni di sicurezza, come l'uso di schermi di piombo e pinze, devono essere sempre adottate durante l'esecuzione di questa procedura.

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Dimostriamo la metalation, purificazione e caratterizzazione di complessi di lantanidi. I complessi qui descritto può essere coniugato con macromolecole di attivare il rilevamento di queste molecole usando la risonanza magnetica.

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