Name: Analisi dellimmunofluorescenza della formazione di granuli di stress dopo la sfida batterica delle cellule dei mammiferi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 37 s
Description: Scopri l'analisi immunofluorescente della formazione di granuli di stress nelle cellule dei mammiferi dopo sfida batterica. Questo metodo automatizzato permette di studiare le risposte cellulari nelle interazioni ospite-patogeno.

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PS è un destinatario della Gran e del Gran Premio di Sfida Melinda Gates OPP1141322. PV è stato sostenuto da una borsa di studio della Posta Nazionale della Scienza Nazionale della Scienza Nazionale e una borsa post-dottorale Roux-Cantarini. PJS è supportato da una sovvenzione HHMI e ERC-2013-ADG 339579-Decrypt.

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il protocollo descritto qui descrive l&#39;induzione, la localizzazione e l&#39;analisi di SG in cellule non infette e nelle cellule infette con il patogeno citosolico S. flexneri in presenza o in assenza di stress esogeno. Utilizzando il software di imaging gratuito, i protocolli consentono l&#39;analisi precisa qualitativa e quantitativa della formazione SG per individuare e confrontare statisticamente le differenze in determinati fenotipi. Ci sono diversi passaggi critici all&#39...

Visualizzare le interazioni host-patogeni a livello cellulare è un metodo potente per ottenere approfondimenti sulle strategie patogene e per identificare i principali percorsi cellulari. Infatti, gli agenti patogeni possono essere utilizzati come strumenti per individuare importanti bersagli o strutture cellulari, in quanto gli agenti patogeni si sono evoluti per subire i processi cellulari centrali come una strategia per la loro sopravvivenza o la loro propagazione. La visualizzazione dei componenti cellulari può essere ottenuta mediante espressione recombinante di proteine ​​ad oscillazioni fluorescenti. Mentre questo consente l&#39;analisi in tempo reale, la generazione di linee cellulari con proteine ​​ad hoc specifiche tagliate è altamente laboriosa e può causare effetti indesiderati indesiderati. Più conveniente è la rilevazione di fattori cellulari che utilizzano anticorpi specifici, in quanto possono essere analizzati simultaneamente più fattori host e non si limitano ad un particolare tipo di cellula. Un inconveniente è che solo una visione statica può essere catturata in quanto l&#39;analisi dell&#39;immunofluorescenza richiede il fixat delle cellule hostionico. Tuttavia, un importante vantaggio dell&#39;immagine di immunofluorescenza è che si presta facilmente ad analisi qualitative e quantitative. Questo a sua volta può essere utilizzato per ottenere differenze statisticamente significative per fornire nuove conoscenze sulle interazioni host-patogeno. I programmi di analisi fluorescenti delle immagini sono potenti strumenti analitici per eseguire analisi 3D e 4D. Tuttavia, l&#39;elevato costo del software e la sua manutenzione fanno dei metodi basati sul libero software open source più ampiamente attraenti. L&#39;analisi approfondita dell&#39;immagine usando il software di bioanalisi è preziosa in quanto dimostra l&#39;analisi visiva e, quando assegna significati statistici, aumenta la fiducia nella correttezza di un determinato fenotipo. In precedenza, gli SG sono stati analizzati utilizzando il software gratuito ImageJ, che richiede l&#39;identificazione manuale dei singoli SG4. Qui forniamo un protocollo per l&#39;induzione e l&#39;analisi della formazione cellulare SG nel contesto di bacLe infezioni da virus utilizzando il software gratuito di analisi bio-immagine open source ICY (http://icy.bioimageanalysis.org). Il software per l&#39;analisi bio-image è dotato di un programma di rivelatore spot che è adatto per l&#39;analisi SG. Consente di ottimizzare il processo di rilevamento automatico in specifiche aree di interesse (ROI). Ciò supera la necessità di analisi manuale dei singoli SG e rimuove la bias di campionamento. Molte sollecitazioni ambientali inducono la formazione di SG, che sono strutture fisiologiche citocholiciche, non membranose di 0,2-5 μm di diametro 5 , 6 . Questa risposta cellulare è evolutamente conservata in lieviti, piante e mammiferi e si verifica quando la traduzione globale delle proteine ​​è inibita. Comprende l&#39;aggregazione di complessi di iniziazione di traduzione bloccati in SG, considerati come luoghi di detenzione per mRNA traslazionale-inattivi, consentendo la traduzione selettiva di un sottoinsieme di mRNA cellulari.Dopo la rimozione dello stress, SG si dissolvono e il tasso globale di sintesi proteica riprende. Gli SG sono composti da fattori di innesco di allungamento della traduzione, proteine ​​coinvolte nel metabolismo RNA, proteine ​​legate all&#39;RNA, nonché proteine ​​di ponteggio e fattori coinvolti nella segnalazione delle cellule ospite 2 , anche se la composizione esatta può variare a seconda dello stress applicato. I fattori ambientali che inducono la formazione di SG includono la fame di aminoacidi, irraggiamento UV, shock termico, shock osmotico, stress reticolare endoplasmatico, ipossia e infezione virale 2 , 7 , 8 . Molti progressi sono stati fatti per comprendere come i virus inducano e sovvertire la formazione di SG, mentre poco si sa ancora su come altri agenti patogeni, quali batteri, funghi o patogeni protozoi, influenzino questa risposta cellulare 1 , 7 . ShigeLla flexneri è un patogeno citosolico facoltativo Gram-negativo di esseri umani e l&#39;agente causale di grave diarrea o shigellosis. La Shigellosis è un grave onere della sanità pubblica e porta a 28.000 morti ogni anno nei bambini di età inferiore ai 5 anni 9 , 10 anni . S. flexneri infetta l&#39;epitelio colonico e si diffonde da cellula a cellula perrottando i componenti citoscheletrici dell&#39;host 11 , 12 . L&#39;infezione dell&#39;epitelio supporta la replica di S. flexneri all&#39;interno del citosolo, ma i macrofagi infetti muoiono attraverso un processo di morte delle cellule infiammatorie chiamato pyroptosis. L&#39;infezione porta ad un massiccio reclutamento di neutrofili e infiammazioni gravi che sono accompagnate da calore, stress ossidativo e distruzione dei tessuti. Pertanto, mentre le cellule infette sono soggette a sollecitazioni interne indotte dall&#39;infezione, come la disfunzione di Golgi, lo stress genotossico e il riarrangiamento citoscheletricoLe cellule infette sono sottoposte anche a stress ambientali dovuti al processo infiammatorio. La caratterizzazione dell&#39;effetto dell&#39;infezione di S. flexneri sulla capacità delle cellule di rispondere alle sollecitazioni ambientali con un numero di marcatori SG ha dimostrato che l&#39;infezione porta a differenze qualitative e quantitative nella composizione SG 3 . Tuttavia, poco si sa di altri patogeni batterici. Qui descriviamo una metodologia per l&#39;infezione di cellule ospitanti con il patogeno citosolico S. flexneri , l&#39;accentuazione delle cellule con differenti sollecitazioni ambientali, l&#39;etichettatura dei componenti SG e l&#39;analisi qualitativa e quantitativa della formazione e della composizione SG nel contesto di infetti E le cellule non infette. Questo metodo è ampiamente applicabile ad altri patogeni batterici. Inoltre, l&#39;analisi delle immagini della formazione SG può essere utilizzata per infezioni da virus o da altri agenti patogeni. Può essere utilizzato per analizzare SGFormazione sull&#39;infezione o sull&#39;effetto dell&#39;infezione sulla formazione di SG in risposta a sollecitazioni esogene.

<table><tbody><tr><td><forte>Anticorpi primari</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>eIF3b (N20), origine capra&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-16377</td><td>Marcatore SG robusto e ampiamente utilizzato. La colorazione citosolica consente la delineazione cellulare. Diluizione 1:300</td></tr><tr><td>eIF3b (A20), origine capra&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-16378</td><td>Stesso bersaglio di eIF3b (N20) e nelle nostre mani era identico a eIF3b (N20). Diluizione 1:300</td></tr><tr><td>eIF3A (D51F4), coniglio di origine (MC: monoclonale)</td><td>Cell Signaling</td><td>3411</td><td>Parte del complesso multiproteico eIF3 con eIF3b . Diluizione 1:800</td></tr><tr><td>eIF4AI, origine capra&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-14211</td><td>Consigliato da (Ref # 13). Diluizione 1:200</td></tr><tr><td>eIF4B, origine coniglio</td><td>Abcam</td><td>ab186856</td><td>Buon marcatore di granuli di stress nelle nostre mani. Diluizione 1:300</td></tr><tr><td>eIF4B, origine coniglio</td><td>Cell Signaling</td><td>3592</td><td>Raccomandato da Ref # 13. Diluizione 1:100</td></tr><tr><td>eIF4G, origine coniglio</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-11373</td><td>Marcatore SG ampiamente utilizzato. (Ref # 13): potrebbe non funzionare bene nelle linee cellulari di topo. Diluizione 1:300</td></tr><tr><td>G3BP1, origine coniglio (MC: monoclonale)</td><td>BD Biosciences</td><td>611126</td><td>Marcatore SG ampiamente utilizzato. Diluizione 1:300</td></tr><tr><td>Tia-1, capra di origine</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-1751</td><td>Marcatore SG ampiamente usato. Può essere trovato anche nei corpi P quando sono presenti SG (Ref # 13). Diluizione 1:300</td></tr><tr><td>Alexa-coniugato Anticorpi secondari</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A488 anti-capra, origine asino</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-11055</td><td>Incrocio assorbito. Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>A568 anti-capra, origine asino</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-11057</td><td>Incrocio assorbito. Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>A488 anti-topo, origine asino</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-21202</td><td>Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>A568 anti-topo, origine asino</td><td>Thermo Fisher</td><td>A10037</td><td>Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>A647 anti-topo, origine asino</td><td>Thermo Fisher</td><td>A31571</td><td>Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>A488 anti-coniglio, origine asino</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-21206</td><td>Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>A568 anti-coniglio, origine asino</td><td>Thermo Fisher</td><td>A10042</td><td>Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>Altri reagenti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shigella flexneri</td><td></td><td></td><td>Disponibile presso vari laboratori su richiesta</td></tr><tr><td>Brodo di triptone caseina di soia (TCS)</td><td>BD Biosciences</td><td>211825</td><td>Terreno di crescita standard per Shigella, applicazione - crescita batterica</td></tr><tr><td>TCS agar</td><td>BD Biosciences</td><td>236950</td><td>Agar di crescita standard per Shigella, applicazione - crescita batterica</td></tr><tr><td>Congo rosso SERVA</td><td>Electrophoresis GmbH</td><td>27215.01</td><td>Strumento di distriminazione per Shigell che hanno perso il plasmide di virulenza, applicazione - crescita batterica</td></tr><tr><td>Poli-L-lisina (PLL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1274</td><td>Utile per rivestire i batteri per aumentare l'infezione, applicazione - infezione</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1397</td><td>Uccisione selettiva di batteri extracellulari ma non citosolici, applicazione - infezione</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>15630-056</td><td>Tampone PH utile quando le cellule sono incubate a RT, applicazione - coltura cellulare</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Life Technologies</td><td>31885</td><td>Terreno di coltura standard per cellule HeLa, applicazione - coltura cellulare</td></tr><tr><td>Siero fetale di vitello (FCS)</td><td>Biowest</td><td>S1810-100</td><td>Integrazione al 5% utilizzata per il terreno di coltura cellulare HeLa, applicazione - coltura cellulare</td></tr><tr><td>Aminoacidi non essenziali (NEAA)</td><td>Life Technologies</td><td>11140</td><td>Diluizione 1:100 utilizzata per il terreno di coltura cellulare HeLa, applicazione - coltura cellulare</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Diluente reagente, applicazione - coltura cellulare</td></tr><tr><td>Arsenito di</td> <td>sodioSigma-Aldrich</td><td>S7400</td><td>Potente induttore di granuli di stress (Nota: altamente tossico, è necessario un trattamento e uno smaltimento speciali), applicazione - induttore di stress</td></tr><tr><td>Clotrimazolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6019</td><td>Potente induttore di granuli di stress (Nota: pericolo per la salute, manipolazione e smaltimento speciali richiesti), applicazione - induttore di stress</td></tr><tr><td>Paraformaldeide (PFA</td><td>Microscopia elettronica Scences</td><td>15714</td><td>Il 4% di PFA viene utilizzato per la fissazione standard delle cellule, applicazione - fissazione</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Utilizzato allo 0,03% per la permeabilizzazione delle cellule ospiti prima della colorazione immunofluorescente, applicazione - permeabilizzazione</td></tr><tr><td>A647-falloidina</td><td>Thermo Fisher</td><td>A22287</td><td>La diluizione è a 1:40, meglio aggiunta durante la colorazione secondaria degli anticorpi, applicazione - colorazione</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>Colorante per acido nucleidico utilizzato per visualizzare sia il nucleo ospite che i batteri, applicazione - colorazione</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BR701501</td><td>Pellicola di paraffina utile per la colorazione immunofluorescente di vetrini coprioggetti, applicazione - colorazione</td></tr><tr><td>Prolong Gold</td><td>Thermo Fisher</td><td>36930</td><td>Robusto mezzo di montaggio che funziona bene per la maggior parte dei fluorofori, applicazione - montaggio</td></tr><tr><td>Mowiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81381</td><td>Terreno di montaggio economico e robusto che funziona bene per la maggior parte dei fluorofori, applicazione - montaggio di</td></tr><tr><td>piastre per colture cellulari a 24 pozzetti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3527</td><td>Piastre per colture tissutali standard, applicazione - colture cellulari</td></tr><tr><td>vetrini coprioggetti in vetro da 12 mm NeuVitro</td><td></td><td>1001/12</td><td>Supporto per colture cellulari per applicazioni di immunofluorescenza, applicazione - pinza per supporto cellulare</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81381</td><td>Mezzo di montaggio economico e robusto che funziona bene per la maggior parte dei fluorofori, applicazione - montaggio</td></tr><tr><td>Programmi e apparecchiature</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad Software</td><td></td><td>Analisi dei dati e programma grafico con robuste opzioni di test statistici, applicazione - analisi dei dati</td></tr><tr><td>Leica SP5</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Microsope confocale, applicazione - immagine acquisizione</td></tr><tr><td>Imaris</td><td>Bitplane</td><td></td><td>Professional programma di analisi delle immagini, applicazione - analisi dei dati</td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>Programma di analisi dei dati e grafica, applicazione - analisi dei dati</td></tr></tbody></table>

analisi dell&#39;immunofluorescenza della formazione di granuli di stress dopo la sfida batterica delle cellule dei mammiferi

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

L&#39;imaging fluorescente dei componenti cellulari è uno strumento efficace per indagare le interazioni host-patogeno. I patogeni possono influenzare molteplici caratteristiche delle cellule infette, tra cui l&#39;organologia ultrastruttiva, l&#39;organizzazione della rete citoscheletrica, nonché i processi cellulari come la formazione di Stress Granule (SG). La caratterizzazione di come i patogeni subiscono i processi dell&#39;host è una parte importante e integrale del campo della patogenesi. Mentre i fenotipi variabili possono essere facilmente visibili, l&#39;analisi precisa delle differenze qualitative e quantitative nelle strutture cellulari indotte dalla sfida patogena è essenziale per definire differenze statisticamente significative tra i campioni sperimentali e quelli di controllo. La formazione di SG è una risposta a stress evolutivamente conservata che conduce alle risposte antivirali e è stata da tempo studiata usando infezioni virali 1 . La formazione di SG influenza anche le cascate di segnalazione e possono avere altri conseq ancora sconosciuti2 . La caratterizzazione di questa risposta allo stress a patogeni diversi dai virus, come gli agenti patogeni batterici, è attualmente un&#39;area emergente di ricerca 3 . Per ora, l&#39;analisi quantitativa e qualitativa della formazione SG non è ancora abitualmente usata, anche nei sistemi virali. Qui descriviamo un metodo semplice per indurre e caratterizzare la formazione di SG in cellule non infettate e in cellule infettate da un patogeno batterico citosolico, che influenza la formazione di SG in risposta a varie sollecitazioni esogene. L&#39;analisi della formazione e della composizione SG è ottenuta utilizzando un certo numero di differenti marcatori SG e il plug-in del rilevatore spot di ICY, uno strumento di analisi delle immagini open source.

Per spiegare e dimostrare il protocollo descritto in questo manoscritto abbiamo caratterizzato l&#39;immagine di SGs indotti da clotrimazolo nelle cellule HeLa infette o non con il patogeno citosolico S. flexneri . Una descrizione del procedimento è presentata in figura 1 e comprende la virulenza e avirulente S. flexneri su piastre rosse di Congo, preparazione dei batteri, infezione, aggiunta di stress ambientali, fissazione e colorazione d...

Descriviamo un metodo per l&#39;analisi qualitativa e quantitativa della formazione di granuli di stress nelle cellule dei mammiferi dopo che le cellule sono sfidate con batteri e una serie di sollecitazioni diverse. Questo protocollo può essere applicato per indagare la risposta del granulo di stress cellulare in una vasta gamma di interazioni ospedaliere-batteriche.

Analisi dell&#39;immunofluorescenza della formazione di granuli di stress dopo la sfida batterica delle cellule dei mammiferi

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

L'obiettivo generale di questo esperimento è valutare gli effetti di un'infezione batterica sulla capacità delle cellule ospiti di formare granuli di stress in risposta a uno stress esogeno. Questo metodo rappresenta uno strumento prezioso nel campo della microbiologia cellulare per determinare se un determinato patogeno sia in grado o meno di alterare o eludere l'intero percorso dei granuli di stress. Il principale vantaggio di questa tecnica consiste nella possibilità di analizzare i granuli di stress in modo rigoroso e automatizzato, sia qualitativamente che quantitativamente, utilizzando programmi gratuiti di analisi delle immagini.Questo metodo fornisce informazioni sulle dinamiche della formazione e composizione dei granuli di stress e su come questi parametri siano influenzati da un patogeno specifico. Grazie. Prima di iniziare la prova, inoculare una colonia rossa di batteri S.flexneri M90T da una piastra di agar al tripticaso con 1% di agar al rosso Congo appena striata in un tubo conico da 15 millilitri contenente otto millilitri di brodo tripticaso.Dopo aver serrato il coperchio, incubare la colonia tutta la notte in agitazione a 222 giri al minuto e 30 gradi Celsius. Il

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Immunologia e Infezioni

Fonte: Cayron, J., et al. Analisi multiscala della crescita batterica sotto stress. J. Vis. Exp. (2019).Questo video mostra come preparare e utilizzare una piastra microfluidica per l'imaging di cellule batteriche in condizioni di stress. Delinea il processo di introduzione di una coltura batterica e di un mezzo antibiotico che induce stress, seguito dal caricamento cellulare e dal setup microscopico. L'imaging time-lapse in modalità contrasto di fase viene quindi utilizzato per osservare lo...

Analisi microscopica della crescita batterica sotto stress mediante camere microfluidiche

Fonte: Vonaesch, P. et. al., Analisi immunofluorescenza della formazione di granuli da stress dopo sfida batterica nelle cellule di mammiferi. J. Vis. Esp. (2017)Questo video mostra l'infezione delle cellule epiteliali con il batterio patogeno Shigella flexneri e la conseguente risposta cellulare dell'ospite. Le proteine fettrici batteriche interrompono la traduzione dell'ospite, innescando la formazione di organelli privi di membrana chiamati granuli di stress, che riflettono la risposta...

Formazione dei granuli da stress durante l'infezione da Shigella delle cellule epiteliali cancerose

Questo video mostra un test per caratterizzare e quantificare i granuli di stress dei mammiferi, che consistono in mRNA, proteine leganti l'RNA (RBP) e varie altre proteine.

Un test di immunofluorescenza per caratterizzare e quantificare i granuli di stress dei mammiferi

Due metodi complementari basati sulla citometria di flusso e microscopia sono presentati che consentono la quantificazione, a livello di singola cellula, delle dinamiche di espressione genica indotte dall'attivazione di una via MAPK in lievito.

La quantificazione temporale di espressione MAPK indotta in cellule di lievito singole

Abbiamo sviluppato una piattaforma microfluidica per test di suscettibilità agli antibiotici rapidi. Il fluido viene passato ad alta velocità sui batteri immobilizzati sul fondo di un canale microfluidico. In presenza di stress e antibiotici, i ceppi sensibili di batteri muoiono rapidamente. Tuttavia, i batteri resistenti possono sopravvivere a queste condizioni stressanti.

Test di suscettibilità agli antibiotici indotti dallo stress su un chip

Granuli di stress (SGS) sono granuli citoplasmatici RNA contenenti particelle in fase di stallo ribonucleoproteiche (RNP), e importante nella risposta cellulare alle varie sollecitazioni. Dinamica di SG possono essere seguite in cellule vive visualizzando la localizzazione di un componente taggato di SG in cellule primarie transfettate dopo stress.

Visualizzazione dei G3BP stress Granuli Dynamics in cellule primarie in diretta

Granuli di stress (SG) sono strutture citoplasmatiche non membrane che si formano in cellule esposte a varie sollecitazioni. Gli SG contengono mRNA, proteine ​​legate all'RNA, piccole subunità ribosomali, fattori correlati alla traduzione e varie proteine ​​di segnalazione cellulare. Questo protocollo descrive un flusso di lavoro che utilizza diversi approcci sperimentali per rilevare, caratterizzare e quantificare SG in buona fede .

Metodi per classificare i foci citoplasmatici come granuli di stress di mammiferi

Vi presentiamo un protocollo per l'utilizzo di microscopia STED contemporaneamente strutture di actina di immagine, microtubuli e proteine leganti plus-fine dei microtubuli in cellule di B che si sono diffuse sulle lamelle rivestite con gli anticorpi per il recettore delle cellule B, un modello per la fase iniziale di formazione della sinapsi immuni.

Visualizzando l'actina e Cytoskeletons dei microtubuli alla sinapsi della B-cellula Immune usando la microscopia di svuotamento (STED) emissione stimolata

Abbiamo sviluppato un test multi-pozzetto formato poliacrilammide per sondare l'effetto di rigidità di matrice extracellulare sull'infezione batterica delle cellule aderenti. Questo test è compatibile con citometria a flusso, immunostaining e microscopia di forza di trazione, permettendo per la misurazione quantitativa delle interazioni biomeccaniche tra cellule, loro matrice extracellulare e batteri patogeni.

Un'analisi di poliacrilammide-basata di formato multi-pozzetto per studiare l'effetto della matrice extracellulare rigidità sull'infezione batterica delle cellule aderenti

Vi presentiamo un flusso di lavoro liberamente disponibile costruito per una rapida esplorazione e analisi accurata dei corpi cellulari in specifici compartimenti cellulari in immagini di microscopia a fluorescenza. Questo flusso di lavoro user-friendly è progettato sul software open-source E utilizza anche funzionalità ImageJ. La pipeline è conveniente senza conoscere l'analisi delle immagini.

Substructure Analyzer: un flusso di lavoro facile da usare per l'esplorazione rapida e l'analisi accurata dei corpi cellulari nelle immagini di microscopia a fluorescenza

Scopri l'analisi immunofluorescente della formazione di granuli di stress nelle cellule dei mammiferi dopo sfida batterica. Questo metodo automatizzato permette di studiare le risposte cellulari nelle interazioni ospite-patogeno.

Analisi dell'immunofluorescenza della formazione di granuli di stress dopo la sfida batterica delle cellule dei mammiferi

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