Misurazione di High-throughput di membrana plasmatica risigillazione efficienza in cellule di mammifero

Questo saggio è stato sviluppato per affrontare le questioni chiave nel campo della biologia delle membrane plasmatiche e per stabilire come le cellule danneggiate in modo efficiente possano risigillare la loro membrana plasmatica. Questa tecnica può essere utilizzata per misurare l'efficienza del resealing della membrana plasmatica in una capacità ad alta produttività e per identificare proteine specifiche e percorsi corrispondenti che mediano il resealing della membrana plasmatica. Inizia aggiungendo 20 millilitri di una pipetta sierologica 2,5 per 10 alla quinta cellula HeLa per millilitro di sospensione media di crescita in un bacino di pipetta sterile e usa una pipetta sierologica da 10 millilitri per mescolare accuratamente le cellule.

Successivamente, utilizzare una micropipetta multicanale per seminare 100 microlitri di cellule per pozzo in triplice copia in una piastra trattata con coltura di tessuto polistirolo nero a 96 po 'di fondo piatto e chiaro. Ricorda che una distribuzione omogenea delle cellule è la chiave per un esperimento riuscito poiché i confronti tra tutte le condizioni sperimentali richiedono conteggi di cellule equivalenti. Dopo 24 ore nell'incubatore di coltura cellulare umidificato a 37 gradi Celsius e 5%CO2, prevendite il lettore di piastre a 37 gradi Celsius e impostate la configurazione ottica sul monocromatore, la modalità di lettura sulla fluorescenza e il tipo di lettura sulla cinetica.