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Multiplexed immunofluorescenza analisi e quantificazione di Intratumoral PD-1+ +
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JoVE Journal Cancer Research
Multiplexed Immunofluorescence Analysis and Quantification of Intratumoral PD-1+ Tim-3+ CD8+ T Cells

Multiplexed immunofluorescenza analisi e quantificazione di Intratumoral PD-1+ + Tim-3 CD8+ T cellule

Full Text
15,654 Views
09:32 min
February 8, 2018

DOI: 10.3791/56606-v

Clémence Granier1, Emeline Vinatier2,3,4, Elia Colin2,3, Marion Mandavit2,3, Charles Dariane2,3,5, Virginie Verkarre6, Lucie Biard7, Rami El Zein2, Corinne Lesaffre2, Isabelle Galy-Fauroux2, Hélène Roussel2,3,6, Eléonore De Guillebon8, Charlotte Blanc2,3, Antonin Saldmann4, Cécile Badoual2,6, Alain Gey*4, Éric Tartour*2,4

1PARCC-INSERM U970,Université Paris Descartes, 2INSERM U970,Université Paris Descartes, 3Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer, 4Department of Immunology,Hopital Européen Georges Pompidou, 5Department of Medical Urology,Hopital Européen Georges Pompidou, 6Department of Pathology,Hopital Européen Georges Pompidou, 7Université Paris Diderot Paris 7, 8Department of medical oncology,Hopital Européen Georges Pompidou

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents an innovative multiplexed immunofluorescence analysis method for automatic counting of tumor immune cells based on their phenotype. The technique is designed to analyze the tumor microenvironment and identify prognostic biomarkers for immunotherapy response.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Oncology
  • Cell Biology

Background

  • The tumor microenvironment plays a crucial role in cancer progression and treatment response.
  • CD8 + T cells are important for immune response in tumors.
  • Existing methods for cell counting can be time-consuming and require extensive data processing.
  • This study aims to streamline the analysis of immune cell phenotypes.

Purpose of Study

  • To develop a reliable method for automatic counting of immune cells in tumor samples.
  • To facilitate large cohort analyses in cancer research.
  • To improve the understanding of immune interactions within the tumor microenvironment.

Methods Used

  • Multiplexed immunofluorescence for cell phenotype analysis.
  • In situ fluorescence multispectral imaging for automatic counting.
  • Preparation of tissue sections with hydrophobic barriers for imaging.
  • Data processing techniques to analyze cell populations.

Main Results

  • The method allows for efficient counting of CD8 + T cell subpopulations.
  • Results indicate potential prognostic markers derived from the tumor microenvironment.
  • The technique is reproducible and suitable for large-scale studies.
  • Improved understanding of immune cell dynamics in tumors.

Conclusions

  • This innovative method enhances the analysis of tumor immune cells.
  • It provides a framework for identifying biomarkers for immunotherapy.
  • The approach can be adapted for various research applications in oncology.

Frequently Asked Questions

What is the significance of CD8 + T cells in tumors?
CD8 + T cells are crucial for mediating anti-tumor immunity and can influence treatment outcomes.
How does this method improve upon traditional cell counting?
It automates the counting process, reducing time and potential human error in data analysis.
Can this technique be used for other types of immune cells?
Yes, the method can be adapted to analyze various immune cell types within the tumor microenvironment.
What challenges do researchers face when using this method?
New users may find the phenotyping procedure lengthy and data processing complex.
Is this method suitable for clinical applications?
While primarily for research, it has potential clinical applications in identifying biomarkers for immunotherapy.

Studiando il microambiente tumorale può identificare biomarcatori prognostici o predittivi della risposta clinica all'immunoterapia. Presentato qui, è un metodo innovativo basato su in situ di fluorescenza multispectral imaging per analizzare e contare automaticamente varie sottopopolazioni di CD8+ T cellule. Questa tecnica riproducibile ed affidabile è adatta per analisi di grande gruppo.

L'obiettivo generale di questa analisi di immunofluorescenza multiplex è quello di contare automaticamente le cellule in base al loro fenotipo. Questo metodo consente la multifluorescenza e la conta cellulare automatica per analizzare il fenotipo e la funzione delle cellule immunitarie tumorali all'interno di un microambiente tumorale. Questa tecnologia ha facilitato la generazione di due tipi di prognosi composita per la previsione da parte dei marcatori derivati direttamente dal microambiente tumorale.

In generale, le persone che non conoscono questo metodo possono avere difficoltà perché la procedura di fenotipizzazione è molto lunga e i dati grezzi risultanti richiedono un'ulteriore elaborazione. Abbiamo avuto l'idea di questo metodo quando abbiamo cercato di caratterizzare il fenotipo e le interazioni immunologiche delle cellule miranty annhodge. Dopo lo scongelamento, utilizzare un tovagliolo di carta per asciugare accuratamente i vetrini attorno alle sezioni di tessuto e quindi circondare i tessuti con una penna barriera idrofobica.

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Immunologia problema 132 Multiplex in situ imaging multispettrale tecnica di immunofluorescenza imaging digitale carcinoma a cellule renali Tim-3 PD-1 microambiente tumorale inibitori di checkpoint in situ analisi unicellulare

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