Confocal Microscopy Reveals Cell Surface Receptor Aggregation Through Image Correlation Spectroscopy

Adam C. Parslow; Andrew H.A. Clayton; Peter Lock; Andrew M. Scott

doi:10.3791/57164

Microscopia confocale rivela l'aggregazione di recettore di superficie delle cellule tramite spet...

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Confocal Microscopy Reveals Cell Surface Receptor Aggregation Through Image Correlation Spectroscopy

Microscopia confocale rivela l'aggregazione di recettore di superficie delle cellule tramite spettroscopia di correlazione di immagine

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06:51 min

August 2, 2018

DOI: 10.3791/57164-v

Adam C. Parslow^1,2, Andrew H.A. Clayton³, Peter Lock⁴, Andrew M. Scott^1,2,5,6,7

¹Tumour Targeting Laboratory,Olivia Newton-John Cancer Research Institute, ²School of Cancer Medicine,La Trobe University, ³Centre for Micro-Photonics, Faculty of Science, Engineering and Technology,Swinburne University of Technology, ⁴LIMS Bioimaging Facility, La Trobe Institute for Molecular Science,La Trobe University, ⁵Department of Medical Oncology, Olivia Newton-John Cancer and Wellnes Centre,Austin Health, ⁶Department of Medicine,University of Melbourne, ⁷Department of Molecular Imaging and Therapy,Austin Health

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Gli anticorpi che si legano ai recettori bersaglio sulla superficie delle cellule possono conferire conformazione e alterazioni clustering. Questi cambiamenti dinamici hanno implicazioni per caratterizzare lo sviluppo di farmaci nelle cellule bersaglio. Questo protocollo utilizza la microscopia confocale e spettroscopia di correlazione di immagine attraverso ImageJ/FIJI per quantificare l'entità del recettore sulla superficie cellulare di clustering.

L'obiettivo generale di questo protocollo di spettroscopia di correlazione di immagini è quello di fornire una metodologia accessibile per la quantificazione degli eventi di clustering che si verificano sulla superficie cellulare. Gli anticorpi che si legano ai recettori sulla superficie cellulare possono conferire alterazioni di conferma e clustering. L'analisi di questi processi dinamici è importante per la caratterizzazione dei bersagli farmacologici.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che fornisce una metodologia accessibile per la quantificazione degli eventi di clustering sulla superficie cellulare utilizzando apparati di imaging facilmente accessibili. Per iniziare, seminare 10.000 cellule di carcinoma epidermoide A431 in ciascun pozzetto di un vetrino di imaging a otto camere. Il giorno successivo, aggiungere immediatamente alle cellule 100 nanogrammi per millilitro di ligando EGF per stimolare l'aggregazione del recettore EGF.

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