Saggio di aggregazione cellulare per rilevare le interazioni trans tra le molecole di adesione cellulare

Nel sistema nervoso, le interazioni transcellulari - interazioni tra specifiche molecole di adesione delle cellule sinaptiche, proteine transmembrana, su neuroni presinaptici e postsinaptici - formano un complesso nelle sinapsi, mediando la segnalazione transsinaptica.

Per rilevare le interazioni transcellulari tra le molecole di adesione delle cellule sinaptiche espresse sulle cellule renali embrionali umane attraverso un saggio di aggregazione cellulare, iniziare con sospensioni cellulari trasfettate.

Una popolazione cellulare trasfettata esprime la molecola di adesione cellulare presinaptica desiderata e la proteina fluorescente verde; l'altra esprime la molecola di adesione cellulare postsinaptica specifica e la proteina fluorescente rossa. Si ottengono anche due popolazioni cellulari che esprimono proteine fluorescenti verdi e rosse.

Centrifugare le cellule. Risospendere le cellule in un terreno adatto integrato con ioni calcio. Mescolare equamente le cellule trasfettate di entrambe le popolazioni in una provetta. Ripetere per le altre popolazioni cellulari.

Durante l'incubazione, gli ioni calcio si legano a un sito specifico sulla proteina presinaptica espressa in una popolaz