Formazione immagine confocal di RNA Double-Stranded e Pattern Recognition Receptors in infezione Virus RNA negativo

RNA double-stranded prodotto durante la replicazione del virus RNA possa essere riconosciuto dai recettori di riconoscimento di pattern per indurre una risposta immunitaria innata. Per i virus del RNA negativo-senso, l'interazione tra il basso livello dsRNA e PRRs rimane poco chiaro. Abbiamo sviluppato un metodo di microscopia confocale per visualizzare arenavirus dsRNA e PRR in singole celle.

Il tradizionale saggio di rilevamento dell'RNA a doppio filamento di solito non è abbastanza sensibile da rilevare l'RNA a doppio filamento formato nell'infezione da virus dell'RNA a senso negativo. Pertanto l'interazione tra RNA a doppio filamento e recettori del riconoscimento del modello ospite è rimasta in gran parte sfuggente per questi virus. Utilizzando questo protocollo siamo in grado di visualizzare e caratterizzare l'interazione tra proteina nucleare virale, RNA a doppio filamento e ospitare un PRR a livello a singola cellula per il virus dell'RNA a senso negativo. Questo è un saggio multiplex che consente la colorazione simultanea dell'RNA a doppio filamento e di due bersagli proteici virali o ospiti nelle singole cellule. A differenza del saggio RNA-FISH questa tecnica è indipendente dalla sequenza di RNA e di solito compatibile con il rilevamento di anticorpi di bersagli proteici. Inizia 24 ore prima dell'infezione seminando 200.000 cellule epiteliali polmonari umane A549 su coperchi di vetro rivestito in poli-D-lisina scivola in piastre da 12 po 'e coltivandole a 37