Analisi quantitativa della dinamica dei bordi cellulari durante la diffusione cellulare

Il protocollo descritto in questo video definirà le procedure sperimentali necessarie per l'imaging a grandezza naturale delle cellule di diffusione e l'uso di uno strumento computazionale che quantifica le dinamiche di diffusione delle cellule in modo imparziale e automatizzato. La risorsa di diffusione cellulare consente il tracciamento continuo del movimento del bordo cellulare e dei cambiamenti morfologici durante la diffusione cellulare, che è una caratteristica che manca nella maggior parte dei test di diffusione cellulare esistenti. Anche questo protocollo implementa l'uso dell'elaborazione e dell'analisi automatizzata del computer, fornendo informazioni sulla circolarità cellulare, sui cicli di retrazione dell'area e della sporgenza delle cellule di diffusione.

Tale elaborazione automatizzata riduce la distorsione nell'analisi dei dati e fornisce un metodo robusto per analizzare la dinamica di diffusione delle cellule per un gran numero di celle. Se combinato con trattamenti farmacologici o scienze e tecniche geniche, questo protocollo è suscettibile a velocità su larga scala di lettori molecolari che regolano le sporgenze cellulari. Per il protocollo specificato, Le cellule utilizzate sono fibroblasti embrionali di topo che codificano geneticamente PH-Akt-GFP, che consente l'etichettatura fluorescente della membrana plasmatica.