Preparazione del campione per la visualizzazione tridimensionale basata sulla tomografia computerizzata dei vasi dell'arto posteriore murino

È possibile acquisire immagini TC dei vasi sanguigni negli arti inferiori e negli organi addominali utilizzando il protocollo step. Il metodo consente la valutazione completa di tutti i vasi sanguigni. Inoltre, è possibile valutare solo le arterie o, allo stesso tempo, le arterie e le vene.

È molto importante prevenire coaguli di sangue, perdite o sangue bene ed evitare bolle d'aria. Prima dell'operazione, iniettare 1 unità/grammo di eparina in PBS nella cavità intraperitoneale del topo. Dopo 30 minuti, fare un'incisione della linea mediana nello sterno del topo eutanasizzato e fissare il torace aperto con i perni.

Tagliare l'aorta ascendente prima di rimuovere il cuore, quindi rimuovere il polmone per esporre l'aorta discendente. Tagliare l'aorta discendente in diagonale per rivelare la sezione trasversale della nave. Quindi, inserire un catetere calibro 22 nell'aorta discendente durante l'esecuzione del buffer di vasodilatazione.

Fissare la radice del catetere e fare un nodo per evitare perdite dovute al riflusso. Una volta fatto, iniziare la perfusione con una soluzione vasodilatatrice riscaldata a una pressione fissa tra 13 e 15 kilopascal. Dopo tre minuti, perfondere una soluzione di paraformaldeide al 4% in PBS per 3 minuti.

Arrestare la perfusione e riempire il tubo di prolunga collegato al catetere con 2 ml del mezzo di contrasto appena preparato diluito nel rapporto 1:1 per perfusare a un punto fisso compreso tra 13 e 15 kilopascal. Per visualizzare le arterie, controllare l'unghia del piede della bocca per confermare che il mezzo di contrasto ha raggiunto l'arteria. Allo stesso modo, controllare la vena cava inferiore del diaframma per confermare la completa circolazione del mezzo di contrasto e visualizzare tutti i vasi.

Se la circolazione del mezzo di contrasto è completa, chiudere il rubinetto a tre vie e rimuovere il tubo. Incubare il campione durante la notte a 4 gradi Celsius. In questo protocollo, sono stati visualizzati tutti i vasi negli arti inferiori del mouse.

I risultati di un modello di ischemia degli arti posteriori hanno confermato che l'arteria femorale non legata correva parallela alla vena femorale. Inoltre, l'interruzione del mezzo di contrasto ha reso facile la visualizzazione di un'arteria femorale legata e lo sviluppo di vasi collaterali. Alcuni vasi pieni del mezzo di contrasto potevano essere visti.

D'altra parte, è stata notata anche l'interruzione dei mezzi di contrasto dovuta alla miscelazione di mezzi non contrapposti o a una perfusione insufficiente. Era impossibile visualizzare le arterie sulla superficie del corpo mediante l'osservazione microscopica o stereomicroscopica del mezzo di contrasto, il che rendeva più facile valutare i difetti della vascolarizzazione. È molto importante evitare bolle d'aria quando si inserisce il catetere.

Poiché anche i loro organi addominali sono rilassati, è possibile estrarre dagli organi e fare una TAC. Utilizzando questo metodo, siamo stati in grado di identificare un nuovo quarto di saturazione.