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DOI: 10.3791/64268-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study describes a method for measuring absolute DNA densities within adherent cell nuclei, utilizing Voronoi tessellation of single-molecule localization microscopy (SMLM) data. This approach enables the investigation of spatial constraints in chromatin structures, linking genetic information with cell cycle stages.
Il presente protocollo descrive un metodo che misura la densità assoluta del DNA all'interno di nuclei cellulari aderenti utilizzando la tassellatura Voronoi di dati di microscopia di localizzazione di singole molecole, volume noto, dimensione del genoma e stadio del ciclo cellulare.
Il presente metodo consente di misurare la densità assoluta del DNA nei nuclei cellulari per studiare i vincoli spaziali nelle strutture della cromatina che altrimenti sarebbero caratterizzate solo da modificazioni istoniche post-traduzione. La tassellatura di Voronoi combinata con SMLM consente stime della densità assoluta del DNA in termini di coppia di basi per micrometro quadrato. L'unica conoscenza a priori necessaria è il contenuto totale di DNA del nucleo cellulare misurato.
In esperimenti futuri, sarebbe interessante indagare se le differenze di densità assoluta sono correlate con le informazioni biologiche provenienti da altri metodi, come l'immunofluorescenza delle modifiche epigenetiche o i dati Hi-C. Iniziare ricostruendo l'area scansionata affiancando le singole immagini preregistrate. Aprire CellProfiler e quindi caricare la pipeline cellcycleanalysis.cpproj.
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