Name: Metodo rapido con microsfere magnetiche per la purificazione efficiente dei neutrofili a bassa densità (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Scopri un metodo rapido con microsfere magnetiche per isolare neutrofili a bassa densità da sangue periferico. Questa tecnica garantisce elevata purezza e vitalità cellulare per studi immunologici.

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<table><tbody><tr><td>&nbsp; Anticorpo policlonale anti-citrullina del coniglio</td><td>AbCam</td><td>ab100932</td><td>Diluizione 1/50</td></tr><tr><td>Piastra di coltura tissutale a 96 pozzi</td><td>Costante; Corning, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 anti-umano CD11b di Alexa Fluor 488</td><td>BioLegend</td><td>301317</td><td>0,25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo IgM anti-umano CD66b Alexa Fluor 647</td><td>BioLegend</td><td>305109</td><td>0,05 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-IgG del topo (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>Diluizione 1/50</td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonale IgG1 di topo anti-neutrofili elastasi</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>SC-55549</td><td>10 & micro; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-coniglio IgG (H+L) per l'asino, Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31572</td><td>Diluizione 1/50</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 anti-umano CD62L del topo APC</td><td>BioLegend</td><td>304809</td><td>0,03 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 del topo anti-umano CD14 APC/Cyanine7</td><td>BioLegend</td><td>367107</td><td>0,25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT flow cytometer&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>(laser blu/rosso)</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA) Frazione V</td><td>MP Biomedici</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 del topo Brilliant Violet 510 anti-umano CD33</td><td>BioLegend</td><td>366609</td><td>0,30 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>Dextrano T500</td><td>Farmacosmos A/C</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>Diidrorodamina-123</td><td>Anaspec, Inc.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>Classificatore di celle FACS</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td>Modello FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Merck KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 FITC anti-umano CD98 per topi</td><td>BioLegend</td><td>315603</td><td>0,30 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>Becton Dickinson</td><td>Versione 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza invertita</td><td>Olympus</td><td>Modello IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Eparina</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>Microbiole di chimerismo CD66b di MACSprep</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>Magnete</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Colonna di separazione magnetica</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>Modello 5415C</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di microplacche</td><td>BioTek Instruments</td><td>Sinergia dei modelli HT</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 PE anti-umano CD10 del topo</td><td>BioLegend</td><td>312203</td><td>0,05 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG2a PE anti-umano CD16b topo</td><td>BD Pharmingen</td><td>550868</td><td>Diluizione 1/40</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 di topo anti-umano PE/Cyanine5</td><td>BioLegend</td><td>323013</td><td>0,25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Phorbol 12-miristato 13-acetato (PMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>poli-L-lisina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga refrigerata</td><td>Eppendorf</td><td>Modello 5702R</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di coltura tissutale RPMI-1640</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Green</td><td>Molecular Probes, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescente-20 e nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Laboratori Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

metodo rapido con microsfere magnetiche per la purificazione efficiente dei neutrofili a bassa densità

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

I neutrofili a bassa densità (LDN) in individui sani rappresentano circa il 5% della PBMC (Figura 2A). Il protocollo qui descritto fornisce in genere LDN puro (&gt; 90%). Le cellule vengono anche recuperate in modo efficiente (resa intorno al 98%) con un'elevata vitalità (&gt; 95%); Figura 2B). Per confronto, le LDN sono state anche purificate mediante smistamento cellulare attivato da fluorescenza, come descritto in precedenza<s...

Metodo rapido con microsfere magnetiche per la purificazione efficiente dei neutrofili a bassa densità

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

I neutrofili sono tra le prime cellule ad arrivare sul luogo del infiammatoria risposta immunitaria, e le loro funzioni e meccanismi sono stati ampiamente studiata in vitro. Si dimostra uno standard gradiente di densità metodo di separazione per isolare neutrofili umani da sangue intero utilizzando mezzi di separazione disponibili in commercio.

Neutrofili isolamento Protocollo

Il video spiega un modo per purificare le cellule B mediante targeting immunomagnetico e separazione dalla sospensione di cellule mononucleate del sangue periferico. Il metodo prevede la marcatura di tipi di cellule indesiderate con anticorpi o ligandi specifici (legati a particelle magnetiche) che hanno come bersaglio specifiche proteine della superficie cellulare, da esaurire dalla sospensione cellulare eterogenea mediante separazione magnetica.

Selezione immunomagnetica negativa: un metodo per purificare le cellule B dalle cellule mononucleate del sangue periferico

In questo video, descriviamo la procedura per isolare i neutrofili a bassa densità, o LDN, dal liquido di lavaggio peritoneale di un paziente umano postoperatorio. Le LDN così ottenute possono essere utilizzate in ulteriori esperimenti a valle per comprendere il loro ruolo nella crescita e nella progressione tumorale.

Isolamento peritoneale dei neutrofili a bassa densità: una tecnica per ottenere neutrofili a bassa densità dal liquido di lavaggio peritoneale utilizzando la selezione cellulare attivata magneticamente

Si descrive un protocollo per l'isolamento e la purificazione di neutrofili dal midollo osseo di topo per centrifugazione in gradiente di densità e di etichettatura neutrofili utilizzando coloranti CellTracker. Questo rappresenta un metodo semplice e veloce, riproducibile ed economico per ottenere un gran numero di neutrofili per studi funzionali a valle o di trasferimento ed inseguimento esperimenti adottive.

Isolamento, la purificazione e della dicitura del mouse Bone Marrow neutrofili per studi funzionali ed Esperienze trasferimento adottivo

I neutrofili svolgono un ruolo importante non solo nella difesa dell'ospite contro i microrganismi invasori, ma sono anche coinvolti nella sorveglianza immunitaria delle cellule tumorali. Qui, descriviamo le tecniche relative all'isolamento di neutrofili con proprietà antitumorali e i metodi per monitorare la funzione dei neutrofili antitumorali in vitro e in vivo.

Isolamento e caratterizzazione di neutrofili con proprietà antitumorali

I neutrofili sono il tipo più abbondante di globuli bianchi. L'isolamento dei neutrofili dal sangue umano mediante il metodo di separazione del gradiente di densità e la differenziazione delle cellule promielocitiche umane (HL60) lungo la via granulocitaria sono descritti qui; testare il loro ruolo sulla sensibilità delle cellule di linfoma agli agenti anti-linfoma.

Neutrofili Isolamento e analisi per determinare il loro ruolo nel linfoma a cellule sensibilità agli agenti terapeutici

Le mutazioni nel gene della leucina ricca di parentesi 2 (LRRK2) causano il morbo di Parkinson ereditario. Abbiamo sviluppato un metodo semplice e robusto per valutare il fosfororylazione controllata da LRRK2 di Rab10 nei neutrofili del sangue periferici umani. Questo può aiutare a identificare gli individui con aumento dell'attività del percorso della chinasi LRRK2.

Isolamento del neutrofilo del sangue periferico umano per interrogare il percorso di LRRK2 Kinase associato al Parkinson valutando Rab10 Phosphorylation

Questo protocollo descrive un metodo per l'isolamento dei neutrofili dal sangue intero, dai cappotti buffy o dalle membrane di leucaferesi, ottenendo una buona resa, un'elevata purezza e un'attivazione cellulare minima. Utilizziamo la purificazione a gradiente, la sedimentazione dei globuli rossi (RBC) e la lisi dei globuli rossi per ottenere una preparazione neutrofila di alta qualità / purezza.

Isolamento dei neutrofili umani da Whole Blood e Buffy Coats

Questa ricerca delinea due tecniche per isolare abbondanti trappole extracellulari neutrofile (NET) dal midollo osseo di ratto. Un metodo combina un kit commerciale di isolamento dei neutrofili con la centrifugazione a gradiente di densità, mentre l'altro impiega solo la centrifugazione a gradiente di densità. Entrambi gli approcci producono NET funzionali che superano quelli dei neutrofili del sangue periferico.

Approccio unico per l'isolamento di neutrofili del midollo osseo di ratto con capacità comparabili

Questo protocollo descrive in dettaglio un metodo compatibile con l'automazione ad alto rendimento per isolare cellule mononucleate del sangue periferico umano per la biobanca e altri scopi.

Isolamento di cellule mononucleate del sangue periferico umano da Buffy Coats tramite separazione di microsfere immunomagnetiche ad alto rendimento

In questo caso, forniamo un approccio affidabile per isolare neutrofili a bassa e normale densità dal sangue intero utilizzando l'isolamento magnetico (selezione negativa) e il mezzo a gradiente di densità discontinuo. Garantisce l'isolamento intatto di cellule ad alta purezza (≥93%), facilitando un'analisi accurata a valle delle sottopopolazioni di neutrofili, fondamentale per comprendere il loro ruolo nella salute e nella malattia.

L'isolamento e la caratterizzazione di neutrofili a bassa e normale densità da sangue intero

Scopri un metodo rapido con microsfere magnetiche per isolare neutrofili a bassa densità da sangue periferico. Questa tecnica garantisce elevata purezza e vitalità cellulare per studi immunologici.

Metodo rapido con microsfere magnetiche per la purificazione efficiente dei neutrofili a bassa densità

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