Name: Isolamento efficiente di cellule staminali e adipociti derivati dalladiposo dal tessuto adiposo suino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-26T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Scopri un protocollo rapido per isolare cellule staminali adipose da tessuto suino usando digestione enzimatica e dissociazione meccanica con onde sinusoidali. Questo metodo riduce i tempi e migliora la vitalità cellulare per applicazioni in medicina rigenerativa.

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<ol><li>Qin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+adipose-derived+stem+cells+for+regenerative+medicine%3A+where+challenge+meets+opportunity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci%22%5BJournal%5D)">An update on adipose-derived stem cells for regenerative medicine: where challenge meets opportunity.</a> Adv Sci. 10 (20), 1-27 (2023).</li>
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<li>Liu, Y., Zhao, H., Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+laboratory-based+strategy+for+single+adipocyte+and+adipose-derived+stem+cells+extraction+for+transplantation%3A+an+experimental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">A novel laboratory-based strategy for single adipocyte and adipose-derived stem cells extraction for transplantation: an experimental research.</a> Aesthet Plast Surg. 49, 367-379 (2025).</li>
<li>Tangkanjanavelukul, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+regeneration+potential+in+early+osteoarthritis+of+the+knee%3A+a+prospective%2C+randomized%2C+open%2C+and+blinded+endpoint+study+comparing+adipose-derived+mesenchymal+stem+cell+%28ADSC%29+therapy+versus+hyaluronic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cartilage regeneration potential in early osteoarthritis of the knee: a prospective, randomized, open, and blinded endpoint study comparing adipose-derived mesenchymal stem cell (ADSC) therapy versus hyaluronic acid.</a> Int J Mol Sci. 26 (17), 8476(2025).</li>
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<table><tbody><tr><td>Kit di Dissociazione Tissutale di Tipo A</td><td>Docsense</td><td>TM001</td><td>Contiene un agente di dissociazione tissutale di tipo A (soluzione di tipo A) e un buffer di dissociazione tissutale di tipo A (buffer A).</td></tr><tr><td>Kit per Medium di Differenziazione Adipogenica</td><td>OriCell</td><td>GUXMD-90031</td><td>Utilizzato per la differenziazione adipogenica, inclusi il medio Eagle's modificato (non modificato) di Dulbecco ad alto contenuto di glucosio e il mezzo di manutenzione</td></tr><tr><td>Alizarin Red S</td><td>OriCell</td><td>A5533ALIR-10001</td><td>Colorazione mineralizzata per differenziazione osteogenica (pH 5,2)</td></tr><tr><td>Acido ascorbico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td>Acido L-ascorbico, coltura cellulare testata, per induzione osteogenica</td></tr><tr><td>Bama minipigs</td><td>Chengdu Dossy Animali Sperimentali Co., Ltd</td><td></td><td>Maschi, animali di un anno, di grado SPF, mantenuti secondo procedure standardizzate di vaccinazione, sverminazione e pulizia.https://www.cd-dossy.cn/animalpl_detail/12606067609851863 04.html</td></tr><tr><td>Contatore Automatico di Celle Bio-Rad TC20</td><td>Laboratori Bio-Rad</td><td>1450011</td><td>Contatore automatico di celle per la valutazione della vitalità e della resa</td></tr><tr><td>BODIPY</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3922</td><td>Colorazione lipidica neutra</td></tr><tr><td>BSA (5%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td>Albumina sierica bovina, polvere liofilizzata, per bloccare</td></tr><tr><td>Calcitriolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9756</td><td>1&alpha;,25-Diidrossivitamina D3, per l'induzione osteogenica</td></tr><tr><td>Crivello cellulare (70 & mu; m)</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>Falcon 70 & mu; Filtratore di cellule m, sterile, per la preparazione del campione FACS</td></tr><tr><td>Filtro di cellule (200 e mu; m)</td><td>pluriSelect</td><td>43-50200-03</td><td>pluriScolino, rete PET, monta tubi da 50 mL, sterile e nbsp;</td></tr><tr><td>tubo centrifugo (50 mL)</td><td>Corning</td><td>352098</td><td>Falcon 50 mL tubo conico ad alta nitidezza, sterile, polipropilene</td></tr><tr><td>Slide di conteggio (per Bio-Rad TC20)</td><td>Laboratori Bio-Rad</td><td>1450011</td><td>Slide di conteggio a doppia camera per contatore cellulari automatico TC20 & nbsp;</td></tr><tr><td>piatto di coltura (100 mm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Piatto sterile di polistirene, per la formazione di organoidi a goccia sospeso</td></tr><tr><td>Desametasone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td>&ge; 98%, per induzione adipogenica e osteogenica</td></tr><tr><td>Soluzione salina bilanciata di D-Hanks o PBS</td><td>Gibco</td><td>10010015</td><td>Pre-raffreddato a 4 °C; C, pH 7,4.</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965084</td><td>Questo viene utilizzato per la coltivazione di SVF appena isolata</td></tr><tr><td>DNasi I</td><td>Beyotime</td><td>D7073</td><td>Opzionale, consigliato se si osservano grumi.</td></tr><tr><td>etanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459836</td><td>75% per la disinfezione superficiale.</td></tr><tr><td>Siero Fetale Bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>A4736201</td><td>Sistema Tet approvato, origine USA, sterile &nbsp;</td></tr><tr><td>Citometro di flusso</td><td>BD in Biologia</td><td>BD FACSCanto II</td><td>3 laser (405 nm, 488 nm, 633 nm), 8 canali di fluorescenza, per l'analisi dei marcatori superficiali (CD73, CD90, CD11b, CD45), raggiunge 70 <img alt="Equazione 1" src="/files/ftp_upload/70464/70464eq1.jpg" style="margin: auto; "/> requisito ugello a 20 psi</td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza</td><td>Olympus</td><td></td><td>Modello invertito o verticale capace di set di filtri FITC e DAPI.</td></tr><tr><td>Anticorpi secondari fluorescenti</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001 (anti-topo), A-11008 (anti-coniglio)</td><td>Alexa Fluor coniugata, per immunofluorescenza</td></tr><tr><td>Anticorpi coniugati con fluorocromo (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD in Biologia</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>Per l'analisi citometrica a flusso del fenotipo ADSC</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>Colorazione nucleare per la valutazione delle cellule vive/morte.</td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5879</td><td>&ge; 99% (HPLC), per mezzo di induzione adipogenica</td></tr><tr><td>Soluzione salina sterile gelida</td><td>Baxter</td><td>2F7124</td><td>Iniezione di cloruro di sodio allo 0,9%, USP, per risciacquare i tessuti</td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Ricombinante, espresso nel lievito, per l'induzione adipogenica</td></tr><tr><td>Iodoforo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25104</td><td>Soluzione disinfettante al 2%.</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>Fattore di crescita ridotto, privo di fenolo, per l'inserimento di sferoidi &nbsp;</td></tr><tr><td>Bagno Metallico</td><td>Servicebio</td><td>SMB-H</td><td>Usato per incubazione a 37 °C.</td></tr><tr><td>Oil Red O</td><td>OriCell</td><td>OILR-10001</td><td>Colorazione lipidica per la differenziazione degli adipociti</td></tr><tr><td>Microscopio ottico</td><td>Olympus</td><td></td><td>Microscopio standard da campo chiaro con 10x e linee; 40 obiettivi.</td></tr><tr><td>Kit per medium di differenziazione osteogenica</td><td>OriCell</td><td>GUXMD-90021</td><td>Utilizzato per la differenziazione osteogenica, inclusi il medium Eagle's modificato (non modificato) di Dulbecco ad alto contenuto di glucosio e il medium di manutenzione</td></tr><tr><td>Pipetta P1000 con punte a diametro largo</td><td>Beckman Coulter</td><td>B01113</td><td>Punte a diametro largo Biomek P1000 Span-8, sterili</td></tr><tr><td>Paraformaldeide (4%)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J61899</td><td>Soluzione acquosa, per fissare organoidi &nbsp;</td></tr><tr><td>Pipetta pasteur</td><td>Corning</td><td>7095S-5C</td><td>Sterile, usa e getta.</td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>10.000 U/mL di penicillina, 10.000 e mu; g/mL streptomicina, sterile&nbsp;</td></tr><tr><td>Pentobarbital sodio</td><td>Hikma Pharmaceuticals USA Inc.</td><td>24201-010-20</td><td>Iniettabile, per l'eutanasia (100 mg/kg di peso corporeo, endovenosa). ANDA 203619&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpi primari (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD in Biologia</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>Per l'immunocolorazione organoide</td></tr><tr><td>Buffer di lisi dei globuli rossi (RBC)</td><td>Solarbio</td><td>R1010</td><td>Se necessario per applicazioni a valle.</td></tr><tr><td>Centrifuga refrigerata</td><td>Eppendorf</td><td>5702R</td><td>Utilizzato per i passaggi di centrifugazione a 4 °C.</td></tr><tr><td>Rosiglitazone</td><td>Cayman Chemical</td><td>71740</td><td>&ge; 98%, PPAR & gamma; agonista per l'induzione adipogenica</td></tr><tr><td>Contenitore per oggetti pungenti</td><td>Becton Dickinson</td><td>305270</td><td>Contenitore antiforatura per lame e forbici usate</td></tr><tr><td>Sistema di preparazione per la sospensione a celle singole SoniConvert</td><td>Docsense</td><td>SC-L1W</td><td>Utilizzato per la dissociazione meccanica dei tessuti.</td></tr><tr><td>Tamponamento di colorazione (buffer di colorazione per citometria a flusso)</td><td>eBioscienza (Thermo Fisher Scientific)</td><td>00-4222-57</td><td>200 mL, pronti all'uso, contengono FBS e 0,09% azide di sodio come conservante, per diluizione di anticorpi e cellule, colorazione superficiale e passaggi di lavaggio nella citometria a flusso &nbsp;</td></tr><tr><td>Tubo Eppendorf sterile da 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121.517</td><td>Tubo microcentrifuga Safe-Lock, sterile, per la triturazione dei tessuti</td></tr><tr><td>Piatto di coltura sterile</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Vaso di coltura sterile da 100 mm x 20 mm, per la raccolta dei tessuti</td></tr><tr><td>Pinza sterile</td><td>Sklar</td><td>96-1719</td><td>Pinza sterile per il pollice, seghettata, per la gestione dei tessuti & nbsp;</td></tr><tr><td>Garza sterile</td><td>Dukal Corporation</td><td>7060033</td><td>Compresse di garza sterili, per disinfezione e pulizia</td></tr><tr><td>Forbici oftalmiche sterili</td><td>Sklar</td><td>10023-580</td><td>Forbici a molla stile Vannas, per triturare tessuto in 1-2 mm e sup3; Pezzi</td></tr><tr><td>Rasoio sterile</td><td>3M</td><td>9681</td><td>Rasoio di preparazione chirurgica, per la depilazione dall'area operatoria</td></tr><tr><td>Bisturi sterile</td><td>Integra Miltex</td><td>4-415</td><td>Bisturi sterile usa e getta, per l'incisione</td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche sterili</td><td>Sklar</td><td>10022-580</td><td>Forbici Merit Sterile Iris, per dissezionare vasi sanguigni e tessuto connettivo &nbsp;</td></tr><tr><td>Fiaschetta di coltura cellulare T25</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>Fiaschetta di coltura cellulare Falcon T25, tappo ventilato, sterile</td></tr><tr><td>Triton X-100 (0,1%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Grado di laboratorio, per permeabilizzazione &nbsp;</td></tr><tr><td>Trippan Blue</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>Soluzione allo 0,4% per il conteggio della vitalità cellulare.</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>0,25% tripsina, 1 mM EDTA, per distacco degli ADSC</td></tr><tr><td>&beta;-Glicerofosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422</td><td>Sale disodio pentaidrato, per induzione osteogenica</td></tr></tbody></table>

isolamento efficiente di cellule staminali e adipociti derivati dall'adiposo dal tessuto adiposo suino

Efficient Isolation of Adipose-derived Stem Cells and Adipocytes from Porcine Adipose Tissue

Isolamento efficiente di cellule staminali e adipociti derivati dall'adiposo dal tessuto adiposo suino

Adipose-derived stem cells (ADSCs) have emerged as ideal seed cells in regenerative medicine due to their abundant sources, minimally invasive harvesting, ...

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Biologia

Questo video mostra una tecnica per isolare e coltivare cellule staminali derivate dalla cresta neurale (ADSC) derivate da creste neurali marcate in modo fluorescente da tessuto adiposo dell'arco periaortico murino. Dopo l'isolamento, le NCADSC vengono rilevate, selezionate utilizzando la smistamento cellulare attivata dalla fluorescenza e successivamente coltivate su una piastra, promuovendo la proliferazione cellulare.

Isolamento di cellule staminali di derivazione adiposa da tessuto adiposo periaortico murino

Nel 2001, i ricercatori della UCLA hanno descritto l'isolamento di una popolazione di cellule staminali adulte, chiamate cellule o ASC staminali derivate da tessuto adiposo, dal tessuto adiposo. Questo articolo descrive l'isolamento di ASC da lipoaspirato utilizzando un protocollo digestione enzimatica manuale mediante collagenasi.

Isolamento Manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umani

Questo protocollo descrive l'isolamento di cellule staminali di derivazione adiposa di maiale (pADSC) da tessuti adiposi sottocutanei con esame della multipotenza. I pADSC multipotenti vengono utilizzati per delineare i processi di differenziazione degli adipociti e studiare la transdifferenziazione in più linee cellulari di mesenchima mesodermico o ulteriori linee di ectoderma ed endoderma per studi rigenerativi.

Isolamento e differenziazione delle cellule staminali derivate da tessuto adiposo sottocutaneo da Suini tessuti adiposi

Questo protocollo descrive l'approccio tecnico per isolare sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi di tessuto adiposo bianco (WAT) murino intra-addominale mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza o separazione di microsfere immunomagnetiche.

Isolamento di sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi adiposi intra-addominali murini

Presentiamo un metodo semplice per isolare le cellule progenitrici adipose altamente vitali dalle pastiglie di grasso epididimale del topo utilizzando lo smistamento delle cellule attivato a fluorescenza.

Preparazione di cellule progenitrici adipose dai tessuti adiposi epididimali del topo

Presentiamo un metodo di iniezione cellulare tramite tecnologia waterjet senza ago accoppiato con una sequela di indagini post-parto in termini di vitalità cellulare, proliferazione ed misure di elasticità.

Iniezione di cellule stroma derivate dal tessuto adiposo suino tramite tecnologia Waterjet

Le cellule staminali mesenchimali derivate dal tessuto adiposo (Ad-MSC) possono essere una potenziale fonte di MSC che si differenziano in cellule produttrici di insulina (IPC). In questo protocollo, forniamo passaggi dettagliati per l'isolamento e la caratterizzazione di Ad-MSC epididimali di ratto, seguiti da un protocollo semplice e breve per la generazione di IPC dallo stesso Rat Ad-MSCs.

Isolamento delle cellule staminali mesenchimali del tessuto adiposo di ratto per la differenziazione in cellule produttrici di insulina

Questo protocollo descrive una metodologia per isolare e identificare le cellule staminali mesenchimali (MSC) derivate dal tessuto adiposo da ratti Sprague Dawley.

Isolamento e identificazione di cellule staminali mesenchimali derivate dal tessuto adiposo di ratti Sprague Dawley

Questo protocollo descrive l'isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale (SVF) dal tessuto adiposo murino per ottenere preadipociti e ottenere la differenziazione degli adipociti in vitro. L'uso di un dissociatore tissutale per la digestione della collagenasi riduce la variazione sperimentale e aumenta la riproducibilità.

Isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale dal tessuto adiposo bianco murino mediante un dissociatore tissutale

Abbiamo identificato la placenta come organo principale ematopoietiche durante lo sviluppo. Abbiamo trovato che le cellule staminali ematopoietiche (HSC) sono entrambi generati e ampliato nella placenta in unica nicchie microambientali. Qui, descriviamo le tecniche sperimentali necessari per l'isolamento e la visualizzazione di cellule staminali nella placenta del mouse.

Isolamento e analisi delle cellule staminali ematopoietiche dalla placenta

Scopri un protocollo rapido per isolare cellule staminali adipose da tessuto suino usando digestione enzimatica e dissociazione meccanica con onde sinusoidali. Questo metodo riduce i tempi e migliora la vitalità cellulare per applicazioni in medicina rigenerativa.

Isolamento efficiente di cellule staminali e adipociti derivati dall'adiposo dal tessuto adiposo suino

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