Name: Contrasto di fase e interferenza differenziale contrasto (DIC) Microscopia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Impara le tecniche di microscopia a contrasto di fase e interferenza differenziale contrasto (DIC) per visualizzare campioni biologici trasparenti. Questi metodi migliorano la risoluzione delle strutture cellulari in ricerca biomedica.

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Video clip, dimostrando contrasto di fase e microscopia DIC sono stati prelevati da un altro video-articolo, intitolato <a href="details.stp?ID=197">Livelli di simbiosi</a> . JOVE riconosce gentilmente questo contributo del laboratorio Leadbetter.

Il protocollo testo completo di questo approccio sperimentale è disponibile in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">protocolli di corrente in Biologia Cellulare.</a>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

contrasto di fase e interferenza differenziale contrasto (dic) microscopia

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Microscopia a contrasto di fase è spesso usato per la produzione di contrasto trasparenti, non assorbono la luce, i campioni biologici. La tecnica è stato scoperto da Zernike, nel 1942, che ha ricevuto il premio Nobel per la sua realizzazione. Microscopia DIC, introdotta alla fine del 1960, è stato popolare nella ricerca biomedica perché evidenzia i bordi dei dettagli strutturali del campione, offre sezioni ottici ad alta risoluzione di campioni di spessore tra cui le cellule dei tessuti, le uova, e gli embrioni e non soffre gli aloni fase tipica di immagini a contrasto di fase. Questo protocollo mette in evidenza i principi e le applicazioni pratiche di queste tecniche di microscopia.

Questo protocollo mette in evidenza i principi e le applicazioni pratiche di fase e contrasto interferenziale differenziale (DIC) Microscopia

Contrasto di fase e interferenza differenziale contrasto (DIC) Microscopia

La microscopia a contrasto di fase è spesso utilizzata per generare contrasto in campioni biologici trasparenti e non assorbenti alla luce. La tecnica è stata scoperta da...

La microscopia ottica è uno degli strumenti più importanti, se non il più importante, nel campo della ricerca biomedica. A seconda dell'applicazione, sono desiderabili diversi modi di illuminazione per l'osservazione del campione. Questo video illustrerà due modalità ottiche di illuminazione a luce trasmessa: contrasto di fase e microscopia a contrasto di interferenza differenziale, o DIC.Ciao, sono Victoria San Frolic della struttura centrale di Imaging Ottico presso il Centro per le Scienze della Salute dell'Università del Texas a San Antonio. Oggi vi mostrerò come osservare correttamente i campioni utilizzando la microscopia a contrasto di fase e a contrasto di interferenza differenziale. Cominciamo dunque.La microscopia in campo chiaro standard non è adeguata per visualizzare campioni trasparenti e incolori. La microscopia a contrasto di fase è spesso utilizzata per generare contrasto in campioni biologici trasparenti e non assorbenti alla luce. La tecnica fu scoperta da Zurich nel 1942, il quale ricevette il Premio Nobel per il suo risultato.Il microscopio a contrasto di fase è un microscopio ottico a campo chiaro dotato di speciali obiettivi a contrasto di fase, che contengono una piastra o anello di fase, e di un condensatore anulare al posto di un diaframma. L'anello si trova generalmente nella torretta del condensatore e la sua dimensione deve essere selezionata in base agli obiettivi utilizzati. Dopo aver impostato l'illuminazione Köhler, scegliere l'obiettivo a contrasto di fase appropriato e quindi ruotare l'anello di fase corrispondente nella posizione corretta all'interno del condensatore.Dopo aver allineato correttamente l'anello di fase dell'obiettivo e l'annulus del condensatore in modo che siano concentrici e sovrapposti, possiamo osservare il campione e regolare adeguatamente la messa a fuoco. Vediamo ora come appare il contrasto di fase attraverso il microscopio. Ecco un'immagine di una sezione di fegato di ratto.In contrasto di fase. Questo metodo migliora l'aspetto del materiale biologico modificando il contrasto da diverse sfumature di grigio a sfumature che vanno dal nero al bianco. Tuttavia, si noterà che i campioni sono circondati da un alone, che oscura le strutture fini.Questo alone è un artefatto derivante dall'illuminazione mediante l'anello di fase. Ora noterà che, passando al campo chiaro, questo campione risulta molto difficile da osservare. Tornando al contrasto di fase, possiamo vedere chiaramente la struttura e la forma delle cellule nel tessuto epatico del ratto. Fin dalla sua introduzione alla fine degli anni '60.La microscopia a contrasto di interferenza differenziale, o DIC, è stata molto utilizzata nella ricerca biomedica perché produce immagini ad alta risoluzione di strutture fini, aumentando il contrasto delle interfacce; l'immagine ottenuta corrisponde a una sezione ottica molto sottile. In effetti, la capacità della DIC di produrre sezioni ottiche l'ha resa una modalità utile di illuminazione a luce trasmessa anche per la microscopia confocale. Il microscopio DIC è un microscopio ottico a campo chiaro a cui sono stati aggiunti i seguenti elementi: un polarizzatore posizionato tra la sorgente luminosa e il condensatore.Un prisma divisore del fascio DIC nel condensatore, un prisma combina fasci DIC subito dietro l'obiettivo e un analizzatore nello spazio all'infinito prima dei due oculari. Per ottenere le migliori prestazioni dall'ottica DIC, è importante innanzitutto allineare il microscopio per l'illuminazione di Köhler e quindi inserire gli elementi DIC nel percorso ottico. La luce proveniente dalla sorgente attraversa un polarizzatore e viene quindi divisa dal primo prisma.Questi fasci accoppiati viaggiano vicini l'uno all'altro. Se la coppia attraversa lo stesso materiale nel campione, quando vengono ricombinati dal secondo prisma non interferiscono tra loro e appaiono quindi grigi. Tuttavia, sul bordo di una struttura, uno dei due fasci dell'accoppiamento attraversa un materiale diverso rispetto al suo compagno e viene modificato.Quando questi fasci vengono ricombinati dal secondo prisma, interferiranno in modo costruttivo producendo un punto luminoso oppure in modo distruttivo producendo un punto scuro. Ecco un'immagine di diatomee in contrasto DIC. Si noterà che i dettagli fini della struttura delle diatomee sono chiaramente visibili.Tuttavia, se si rimuovono le ottiche DIC, questi dettagli scompaiono. Il contrasto attraverso il campione è chiaro da un lato e più scuro dall'altro. Questo dà l'impressione di una topografia, ma in realtà si tratta di un'illusione.La direzione dell'effetto di ombra proiettata può essere invertita ruotando il polarizzatore attraverso un punto di incrocio fino al contrasto opposto. Abbiamo appena esaminato le modalità ottiche del contrasto di fase e del DIC. Per ricordarvi, l'eliminazione del contrasto di fase migliora il contrasto dei campioni da neri a bianchi ed è utile per osservare campioni sia incolori che trasparenti.DIC genera anche contrasto nel campione. Lo fa creando un'immagine ad alta risoluzione di una sezione ottica sottile. Ecco tutto.Grazie per aver guardato e buona fortuna con la vostra microscopia.

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Impara le tecniche di microscopia a contrasto di fase e interferenza differenziale contrasto (DIC) per visualizzare campioni biologici trasparenti. Questi metodi migliorano la risoluzione delle strutture cellulari in ricerca biomedica.

Contrasto di fase e interferenza differenziale contrasto (DIC) Microscopia

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