組み換え食品の遺伝子検査

1. 食品サンプルからの DNA の抽出

1. 200 1,000 μ L のボリューム調節可能なマイクロ ピペット、ピペットを使ったり 2 スクリュー キャップ チューブのそれぞれに購入した PCR ミックス行列の 500 μ L を追加します。PCR マトリックスを均等にミックスする各因数のピペットで、上下のピペットします。
2. 1 つのスクリュー キャップ チューブ「非遺伝子組み換え」と「テスト」ラベルを付けます。
3. 認定の非遺伝子組み換え食品の 0.5 g を量り、乳鉢に入れてください。
4. 2.5 mL の蒸留水を加えて、スラリーを形成する 2 分乳棒で粉をひきます。
5. もう一つの 2.5 mL の蒸留水を追加し、杵スラリーはピペットに十分に滑らかになるまで研削を続けます。
6. ピペット 50 μ L を 500 μ L の PCR プレミックスを含むスクリュー キャップ チューブ地面スラリーのラベル「非遺伝子組み換え」卒業のピペットで 50 μ L のマークを使用。チューブを要約します。
7. 1.3-1.6 食品試料を準備する手順を繰り返します。
8. ピペット 50 μ L スクリュー キャップ チューブに地上テスト食品スラリーの「テスト」というラベルの付いた。チューブを要約します。
9. 渦非遺伝子組み換え食品、検査食の PCR は 95 ° C の水浴 5 分で 1 分と場所管用チューブします。渦が利用できない場合は、チューブに水浴に配置する前に混合する数回をフリックします。
10. 5 分間、遠心分離機でチューブを配置します。固体ペレットは、管の下部に形成する必要があります。場合は 5 分、ペレット フォームまで 2 分間隔、再び遠心分離後は、ペレットは形成されていません。
11. チューブは、PCR のためすぐに使用または 1 週間冷蔵庫で保存できます。

2。 PCR の反作用の設定

1. PCR チューブ 1-6 の番号し、それらの初期します。数字は、表 1に記載されている以下のチューブ内容に対応する必要があります。
2. オープン キャップ付きマイクロ チューブ ホルダーでラベル付けされた各 PCR チューブを配置します。
3. 新鮮なヒントを使用すると、追加するたびに、各 PCR チューブに表 1に示されているプライマーの 20 μ L を追加します。チューブをキャップします。
4. 新鮮なヒントを使用すると、各チューブのため、各 PCR の管、ピペットの上澄みからのみしている、管の下部に固体ペレットを回避するのに、表 1に示されている DNA のサンプルの 20 μ L を追加します。
5. 各 DNA のサンプルは、対応する PCR チューブに戻は後、は、上下に軽くピペッティングによる DNA とプライマーを混合するピペットを使用してください。チューブを要約します。
6. サーマルサイクラー内 PCR チューブに置きのサーマルサイクラーをプログラムします。
   1 : 初期変性94 ° c 2 分サイクルします。
   94 ° c 1 分増幅: 40 サイクル (変性)、59 ° C (焼鈍) 1 分と 2 分 (拡張子) のための 72 ° C。
   最終的な拡張: 72 ° C、10 分で 1周します。
   保持: 4 ° C 無期限に。

3. 3% の Agarose のゲルの準備

1. ラボやマスキング テープ、ゲル トレイの開いた端部をしっかりとテープを使用します。テープは溶融 agarose の漏れを防ぐためにトレイの端にシールを確認します。
2. 3 g 以上の 250 mL の三角フラスコに agarose の重量を量り。
3. 100 mL の 1 の x TAE のバッファー (購入または濃縮物から調製した) を追加します。
4. 磁気のホット プレートを使用すると、攪拌棒、ビーカー アガロースをバッファー、およびソリューションに完全に溶解するまで熱が沸騰とが明確になります。また、オーブンにビーカーを置き、すべて 10 s、混合物を沸騰するまで繰り返しと明確なターンを混ぜて攪拌棒を使用して 30 秒間隔のための加熱は電子レンジを使用できます。
5. アガロース溶液の蒸発を防ぐ、還流として 250 mL フラスコの開口部に 50 mL 三角フラスコを反転します。
6. 60 ° C に冷却するアガロース溶液を許可し、各録音されたゲル トレイに 30-50 mL を注ぐ。
7. ゲルの井戸を作成するノッチの最初のペアにゲル櫛を配置します。
8. テープと櫛を削除する前に完全に冷却するゲルを許可します。ゲルが固めるし、クリアから曇りのときに準備ができて、約 10-20 分。

4 PCR 産物の電気泳動

1. ゲル トレイの上にあらかじめ用意された 3% の agarose のゲルを置くか注がれた 3% の agarose のゲルをキャストに使用されているゲル トレイを使用します。
2. 陰極 (ブラック) 末尾に近い井戸を用いた電気泳動室にゲル トレイをスライドさせます。
3. 商工会議所、十分なゲル トレイの上部バッファーの 2 ミリメートルを持っていることに 1 x TAE バッファーを注ぐ。
4. PCR チューブをサーマルサイクラーとマイクロ チューブ ホルダーの場所から取得します。
5. 毎回新鮮なピペット チップを使用して、購入したオレンジ g ローディングの染料 (LD) 各サンプルに 10 μ L を加え、よく混ぜます。
6. 分子量ルーラーの負荷 20 μ l と順序でゲルに各サンプルの 20 μ L (表 2) を示します。
7. 100 V で 30 分のゲルの電気泳動を実行します。
8. トレイから削除する商工会議所とスライドのゲルからゲル トレイを取り外します。染色トレイにジェルを塗布します。
9. ご購入の DNA ゲル染色ゲル全体に染色を配布するためのトレイを慎重に揺れ、5 分間でゲルを浸します。
10. 洗浄容器にゲルを転送し、リンス水道水 (40-55 ° C) 約 10 秒。
11. 最良の結果のための穏やかな揺れで 6 分間温かい水道水で 3 倍を洗浄することによりすすぐ。必要に応じて、目的のコントラストに到達するまで、暖かい水で染め色を続行します。

管番号	プライマー	Dna のサンプル
1	20 μ L 工場プライマー (グリーン)	20 μ L 非 GMO 食品コントロール DNA
2	20 μ L GMO プライマー (赤)	20 μ L 非 GMO 食品コントロール DNA
3	20 μ L 工場プライマー (グリーン)	20 μ L テスト食品 DNA
4	20 μ L GMO プライマー (赤)	20 μ L テスト食品 DNA
5	20 μ L 工場プライマー (グリーン)	20 μ L GMO ポジティブ コントロール DNA
6	20 μ L GMO プライマー (赤)	20 μ L GMO ポジティブ コントロール DNA

表 1。適切な管数やプライマー、DNA のサンプルの一覧です。

まあ 1	サンプル工場プライマー 20 μ L と 1 の非 GMO 食品コントロール。
まあ 2	GMO プライマー 20 μ L で 2 の非 GMO 食品管理をサンプルします。
まあ 3	3 テスト食品工場プライマー 20 μ L のサンプルします。
まあ 4	GMO プライマー 20 μ L で 4 の試験食品をサンプルします。
まあ 5	5 工場プライマー 20 μ L で遺伝子組み換え肯定的な DNA をサンプルします。
まあ 6	GMO プライマー 20 μ L で 6 の遺伝子組み換え肯定的な DNA をサンプルします。
まあ 7	PCR 分子量定規 20 μ L。
まあ 8	空のままにします。

表 2。20 μ L の分子量定規と各サンプルの 20 μ L をゲルに読み込むに適切な順序。