Name: Flashは、E12.5マウス脳の凍結とCryosectioning (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: 学ぶマウスE12.5脳組織の凍結とクリオセクション技術。OCT包埋と液体窒素によるフラッシュフリーズを用いて、神経科学研究における高品質な組織切片の作製方法とトラブルシューティングを解説します。

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<ol><li>希望の時間のためのPBS中4％パラホルムアルデヒドで細胞を固定してください。 </li><li>スクロース注入組織（cryoprotection） <ol><li> 2059チューブにPBS w / vの30％ショ糖液を作る。 </li><li> PBSの組織が3倍リンス（ロッキング付き〜5分）。 </li><li> 30％ショ糖溶液中で組織を置きます。組織は、シンクしません。 </li><li> ℃で一晩、または、それが沈没するまで4で組織を置きます。 </li></ol></li><li>情報と方向でcryomold適切なサイズのラベルを付けます。 </li><li> （泡を避けるため）OCTでcryomoldを埋める。 </li><li> OCTで、それをOCTの風呂に組織を移し、コート</li><li> cryomoldのOCTに組織を移す。 </li><li>顕微鏡下で東洋が組織。 </li><li>プラスチックシャーレに液体窒素を注ぎます。 </li><li>迅速かつ慎重に窒素にcryomoldで組織を下げる。 （水没cryomoldの上部をしないでください。） </li><li> OCTは、白色固体の場合は、-80ストレージ℃の冷凍庫に凍結組織を置く。 </li><li>少なくとも30分間〜20℃に組織を平衡化させます。前の切片に。 </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖溶液</td><td></td><td></td><td>PBS中の30% w/v ショ糖溶液</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td></td><td></td><td>PBS中の4% パラホルムアルデヒド</td></tr></tbody></table>

flashは、e12.5マウス脳の凍結とcryosectioning

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

このビデオで明らかに瞬間冷凍のためのテクニックであり、マウスの胚脳組織をセクショニング。クリオスタットを使用するための有用なヒントが得られる組織のセクションは、クラックや他の歪みのないことを保証するために削減しながら使用できるトラブルシューティングの方法を含めて、与えられている。

Flashは、E12.5マウス脳の凍結とCryosectioning

こんにちは。カリフォルニア大学アーバイン校のEd Maki研究室のSpencer Curleyです。今回はクライオセクショニング（凍結切片作成）の方法について実演します。まず、一般的に使用される以下の試薬を用います。埋設剤（埋込剤）として使用するのは、OCT（Optimal Cutting Temperature compound）です。これは透明な溶液で、非常に粘度が高く、組織を固定しながら向きを調整でき、その後凍結させることができます。最終的に水溶性であるため、どのような染色手順においても除去することが可能です。そこで、組織をモールドに埋入します。これらのクライオモールド生検容器には、さまざまなサイズがあります。マウスの胚組織を使用するため、ここではこの小型のモールドを使用します。組織は液体窒素で急速凍結させます。まず、こちらのタンクからこの保護真空フラスコに液体窒素を満たします。組織を急速冷凍する前に、「凍結保護」と呼ばれる処理を行う必要があります。そうしないと、冷凍そのものによって組織が破壊されてしまいます。具体的には、組織を30% sucrose溶液に一晩浸し、沈ませます。さらに時間がかかっても問題ありませんが、必ず組織が沈むまで浸してください。ご覧のように、胚齢12.5日のマウスの頭部はスクロース溶液に沈んでおり、凍結の準備が整っています。それでは、組織を操作しやすくするため、スクロース溶液に入っている組織をより大きなディッシュに移します。次に、OCTを少量取り、蓋の上に置いて傾斜させた35 mmディッシュに注ぎます。OCTが深さを出すために端に溜まるため、ここでは、鋭利である必要がなく、また他のピンセットを台無しにしたくないため、あえて先の丸い古いピンセットを使用しています。ピンセットを用いて、これらの頭部のうち1つを非常にゆっくりと持ち上げ、最初のOCTバスに入れます。胚をOCTでコーティングします。これにより、組織をより良好かつ均一に凍結させることができます。組織の周囲にスクロースが残留したり、気泡が入ったりしないようにしてください。気泡が入らないように十分に注意してください。OCTを頭部の周囲と下でゆっくりとかき混ぜ、頭部をOCTの中で動かしながら、クライオモールドを満たすまでの数秒間そのままにしておきます。それでは、ここから気泡が入らないように注意しながら、クライオモールドにOCTを注ぎます。そして、モールドの上端まで満たします。お気づきの通り、モールドにラベルを貼っていますので、凍結後でも向きがわかるようになっています。OCTが凍結すると白くなり、組織が見えなくなります。そのため、クライオモールドには必ず油性マジックでラベルを貼ってください。実際、OCTの中に気泡が入ってしまったので、ピンセットを使って縁から押し出します。気泡があると

flash-freezing-and-cryosectioning-e125-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオは、マウスの脳を凍結保存して、腫瘍組織から個別の解剖学的領域または特定の細胞集団を分離する方法を示しています。この手法は、その後の解析のために脳組織形態の最適な光学分解能を得る上で重要です。...

スナップ凍結によるマウス脳の凍結保存:組織学的解析のためのマウス脳全試料の急速凍結技術

このビデオでは、凍結マウス脳腫瘍組織をクライオスタットを使用して切片化する様子を実演しています。このようにして得られた凍結脳組織切片は、さらなる分析まで低温で保存される。...

凍結マウス脳組織切片作製:凍結マウス脳組織から薄い凍結組織切片を得るための手順

このビデオでは、ダウンストリーム分析のために凍結マウス脳組織切片を準備するための詳細なステップバイステップのプロトコルを示しています。...

ダウンストリーム解析のためのマウス脳の処理

ここでは、凍結し、単一脳の処理時間を節約する代わりとして複数の動物から脳組織をセクション...

複数の齧歯動物の頭脳の同時セクショニング

この手順は、安価で一般的に入手可能なツールを使用して高品質のタンパク質およびRNAを得るために離散的な凍結脳領域のコレクションを記述する。...

下流解析のための凍結げっ歯類の脳領域の収集

このプロトコルはmultilabel FISHおよび蛍光性のIHC信号を達成することを目標に、新しい凍結および固定マウス頭脳セクションの蛍光性in situ の交配(魚)および蛍光性のimmunohistochemistry...

マルチプレックス蛍光 In Situ ハイブリダイゼーションと蛍光免疫組織化学の融合による新鮮、凍結、または固定マウスの脳切片の結合(英語)

マウス中枢神経系の組織学的分析のための便利な重力供給灌流法が提示される。リン酸化α-シヌクレインの免疫蛍光検出は、パーキンソン病のマウスモデルにおいて実証されている。この研究はまた、経心経灌流、解剖、組織凍結/埋め込み、および凍結切片化ステップを包括的に記述している。...

マウス中枢神経系の組織学的解析のための重力供給経心筋灌流法

本プロトコルは、色素および凍結切片を用いてウイルス追跡を行う前に、脳定位固定装置注射座標の検証ステップを迅速化するための実際的な戦略を説明しています。...

クライオセクショニングによる脳定位固定装置注射座標の予備検証

この研究では、斬首、固定、凍結切片、蛍光染色、免疫染色、およびイメージングを含む組織処理の簡略化されたプロトコルを提示します。これらは共焦点および多光子イメージングに拡張できます。この方法は、複雑な解剖に匹敵する有効性を維持し、高度な運動能力の必要性を回避します。定量的な画像分析は、広範な調査の可能性を提供します。...

脳蛍光染色および免疫染色を強化するための ショウジョウバエ 頭部の直接凍結切片

網膜は、その層状構造全体で複雑な空間構成を示します。最新の空間トランスクリプトミクスおよびシーケンシング技術では、厚さ20μm&lt;組織切片が必要であり、網膜研究の適用性は限られています。この新鮮凍結凍結切片法は、平面的な空間的関係を維持しながら、マウス網膜の薄い 顔...

顔面 高次元空間分子解析のためのマウス網膜の凍結切片

このプロトコルは、高圧凍結(HPF)とワッフル法、低温集束イオンビーム(cryo-FIB)リフトアウト、線量対称の並列取得を統合することで、厚組織のクライオ電子断層撮影(cryo-ET)を標準化し、マウス海馬での再現可能な 現地...

マウス海馬における厚組織のクライオ電子断層撮影ワークフロー

学ぶマウスE12.5脳組織の凍結とクリオセクション技術。OCT包埋と液体窒素によるフラッシュフリーズを用いて、神経科学研究における高品質な組織切片の作製方法とトラブルシューティングを解説します。

Flashは、E12.5マウス脳の凍結とCryosectioning

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