C.エレガンス生殖腺の押し出し:迅速な解剖技術

- M9バッファーを含むチューブ内で、開発の目的の段階で最大150匹の雌雄同体ワームを収集します。M9バッファーで洗浄し、サンプルを遠心分離することにより、ワームから細菌を取り除きます。

サンプルの損失を防ぐために、上清を除去するときは、解剖顕微鏡でチューブを観察してください。ワームを最小限の量のM9バッファーでガラス皿に移します。レバミゾールを加えてワームを麻酔します。

ワームの頭部と、2つの球根状の構造を含む咽頭または前腸を見つけます。2本の針を使用して、咽頭の後ろのワームを切り裂きました。組織に影響を与えないように、解剖を迅速に完了するようにしてください。

キューティクルが破壊されると、ワームの内圧により、2つの生殖腺アームが押し出されるか、体外に押し出されます。

この例では、免疫蛍光分析のために成虫の生殖腺を解剖します。

- 所望の発達段階で100〜150匹の線虫を選び、100マイクロリットルのM9緩衝液を含む1.5ミリリットルの微量遠心チューブに集めます。次に、微量遠心チューブにさらに900マイクロリットルのM9バッファーを充填し、室温で1,000gで1分間遠心分離します。

解剖顕微鏡下で、900マイクロリットルのM9バッファーを静かに取り出します。その後、さらに2回洗濯を繰り返して、付着した細菌のほとんどを取り除きます。

次に、穴を広げた200マイクロリットルのマイクロピペットチップを使用して、100マイクロリットルのM9バッファーに入ったワームを平らな底のガラス時計皿に移します。次に、1〜3マイクロリットルの0.1モルレバミゾールを皿に加え、穏やかに渦巻きます。次に、2つの25ゲージの針を2つの注射器に取り付けて、各手に1つの解剖ツールを作成します。

解剖顕微鏡下で、各針を各線虫の下および上に配置し、はさみのような動きを使用して、2番目の咽頭球の近くの各線虫に細かい切り込みを入れます。レバミゾールの効果を維持するために、すべての動物を少なくとも5分以内に少なくとも1回カットします。

- 皿の中の動物の解剖が5分以内に完了することが非常に重要です。

- 押し出された生殖腺が表示されない場合は、その動物をスキップしてください。ここには、適切に押し出された生殖腺が表示されます。