寿命分析:C.エレガンスの寿命の測定

- 線虫集団の平均寿命を測定するには、M9バッファー内の発生的に同期したL1幼虫から始めます。幼虫の密度を決定し、次に各プレートに50を追加します。条件ごとに少なくとも3つの複製プレートとバックアッププレートを準備します。

これらのワームがL4ステージに到達するまで正常に発達するのを待ちます。これで、プレートにFUdRを追加すると、ワームが子孫を産むのを防ぐことができます。あるいは、カウント後に毎日ワームを新しいプレートに移動して、1世代の寿命のみを測定していることを確認する必要があります。

次に、オスをすべて取り外します。これにより、性別と交配の変数が実験から削除されます。翌日、自発的な動きや穏やかなタッチへの反応を探して、プレート上の生きているワームの数を数えます。死んだワームをすべて取り除き、番号を記録します。生き残ったワームがなくなるまで毎日数えます。プロトコルの例では、寿命アッセイのデモンストレーションを見ていきます。

- 準備したバクテリア播種プレートに、それぞれ50匹のL1動物を入れます。胚がL4段階に成長するまで、プレートを摂氏20度のインキュベーターにセットします。L1からL4への通常の発達には約40時間かかります。

次に、子孫の生成を防ぐために、各プレートに160マイクロリットルの50x FUdRを追加します。次に、寿命は通常、雌雄同体でのみ測定されるため、オスを削除します。完了したら、プレートを摂氏20度のインキュベーターに再梱包します。

すべてのワームが死ぬまで、毎日彼らの生存率をスコアリングします。これを行うには、動かない各線虫を頭の上のプラチナワイヤーまたはまつげでそっと触れます。非反応性の動物は死んでいるため、プレートから取り除く必要があります。このルーチン中の異常に注意してください。