ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍サンプルの調製:非小細胞肺がん(NSCLC)からの組織および細胞学サンプルを保存するためのプロトコル

- まず、組織サンプルとして、または気管支洗浄液(気道の内側からの細胞を含む生理食塩水洗浄液)からの細胞診サンプルとして肺腫瘍標本を取得します。組織サンプルを調製するには、解剖したばかりの肺組織を包埋カセットに移します。適切な濃度のホルマリンで組織を固定し、保存します。

細胞診サンプルを調製するには、まず、気管支洗浄液をDL-ジチオスレイトールで処理して均質化します。遠心分離機にかけ、上清を取り除きます。次に、粘液溶解液で処理して粘液を液化し、細胞を分離します。遠心分離機で細胞をペレット化し、ホルマリンで固定します。適切なセルブロック調製試薬で細胞を処理し、少量のペレットで作業しながらサンプルを濃縮します。

ペレットを埋め込みカセットに移します。両方のサンプルタイプを、一連の段階的なアルコール浴で脱水することにより処理します。適切な清澄剤を使用してアルコールを除去し、続いてワックスを浸潤させます。.カセットを流動パラフィンワックスに埋め込み、固化させます。これにより、組織の周りに層が形成され、標本が所定の位置に保持されます。

ミクロトームを使用して、薄くスライスした切片を取得します。接着を容易にするために、正に帯電したスライドガラスにセクションを配置します。顕微鏡下でスライドを観察するために乾燥させて染色します。次のプロトコルでは、肺腫瘍組織および細胞診サンプルからの標本調製技術を示します。

まず、腫瘍組織をカセット内の10%中性緩衝ホルマリンに固定し、テキストプロトコルで概説されているように、カセットをパラフィンに埋め込みます。浸潤した組織を、溶融パラフィンで満たされた型に埋め込みます。パラフィンが固まるまで、組織を型にとどめます。この後、ミクロトームを使用して、パラフィン包埋組織を3マイクロメートルの厚さで切片

パラフィンリボンを正に帯電したガラス顕微鏡スライドに移します。その後、スライドを摂氏37度で1時間乾燥させます。まず、気管支洗浄液を防腐剤溶液に集めます。洗浄液を50ミリリットルの円錐管に移します。2グラムのDL-ジチオスレイトールを加え、チューブを30分間ボルテックスします。その後、室温で250倍gで5分間遠心分離します。

上清を取り除き、10ミリリットルの粘液溶解液を追加します。サンプルを中速で20分間振とうし、室温で250gで5分間遠心分離します。この後、上清を取り除き、細胞ペレットを10%中性緩衝ホルマリンを含む収集チューブに沈着させます。

細胞ブロック調製剤を4滴加えます。細胞ペレットをカセットに移します。パラフィン包埋および切片化のために細胞ペレットを固定し、腫瘍組織サンプルの調製について前述したプロセスを使用します。