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Phormidium lacuna フィラメントの培養から始めます。
培養物を短時間均質化してフィラメントクラスターを分解し、均一な懸濁液を生成します。
均質化されたサンプルをペトリプレートに移し、休ませます。
蒸発を減らすためにプレートをセロハンで覆います。
顕微鏡ステージにスライドを置き、サポートプラットフォームとして機能します。
サンプルの入ったプレートをスライドの直接の上に置きます。
低倍率の対物レンズを使用し、培地中に浮遊している細菌フィラメントに焦点を合わせて、その動きを観察します。
フィラメントは、タイプIVの線毛(内膜で組み立てられ、外膜から出てくる微細な繊維)によって駆動され、表面を横切ってゆっくりと滑る動きを示します。
これらの繊維は伸縮して細胞を前方に引っ張り、細胞が滑るようにします。
このアッセイは、液体環境における フォルミジウムラクナ の特徴的な滑走運動性を明らかにします。
P .ラクナを F2培地中で白色光中で50RPM水平撹拌下で約5日間培養し、750ナノメートルでの推定光学密度が0.35になるまで培養します。サンプルを摂氏4度で保存します。フィラメントを超音波で最大出力で1分間均質化し、1サイクルします。
750ナノメートルで光学密度を測定し、8ミリリットルのP .ラクナ を含む培地を6センチメートルのペトリ皿に移します。サンプルが室温に達するまで数分間待ってから、ペトリ皿をセロハンホイルで覆います。カメラ付きの標準顕微鏡のX-Yテーブルに顕微鏡スライドを置きます。
顕微鏡ライトのスイッチを入れ、4倍または10倍の対物レンズを光の経路に移動します。次に、ペトリ皿をスライドの上に置きます。テーブルのX、Y、Zの動きによって、単一のフィラメントまたはフィラメントバンドルを調整します。
単一のフィラメントまたは束の動きを観察し、標準的な顕微鏡カメラで動きを記録します。対物レンズが液体に触れないようにしてください。