マイクロプレートリーダーを用いた細菌増殖の正確かつ高スループット解析

まず、グリセロールストックに保存し、初期の指数関数的段階まで培養して均一な生理状態と再現性を確保する。

培養培地とボルテックスを加えて、細菌を均等に再浮遊させます。

新しい培地で連続的に懸濁液を希釈し、さまざまな初期細胞密度を得ます。

サンプルをマルチウェルプレートの内側ウェルに積み込み、エッジウェルは蒸発による変動を最小限に抑えるためにブランク媒体で満たします。

プレートをマイクロプレートリーダーに入れ、常に振動させ、細菌の増殖に最適な温度を維持します。

細菌が増殖するにつれて、培養物の光学密度(OD)が増加します。

外径を一定の間隔で測定してください。

ブランクウェルから得られた初期外径値を差し引いて、背景吸収を補正します。

次に、定められた時間間隔で測定された連続したOD値から増殖速度を計算し、細菌の増殖動態を高精度かつ高スループットで定量化することを可能にします。

成長をリアルタイムで記録するために、滅菌試薬貯留槽に約25ミリリットルのM63を加えます。次に、連続希釈の準備として900マイクロリットルのM63をマイクロチューブに加えます。次に、解凍したグリセロールストックに900マイクロリットルのM63を加えて渦巻きます。

10倍希釈液のうち100マイクロリットルを、900マイクロリットルのM63と渦を含む別のマイクロチューブに移します。この工程を希望の希釈数に達するまで繰り返します。次に、滅菌された96ウェルの平底マイクロプレートの縁に、8チャンネルピペットを使って200マイクロリットルのM63を充填します。

参照表に従って、希釈されたサンプル1つあたり200マイクロリットルをマイクロプレート井に投入します。加熱やシーディング効率による配分層を避けるために、マイクロプレートの端にあるウェルを試料に使わず、同じサンプルを異なる場所の複数のウェルに積み込んでください。96ウェルのマイクロプレートをプレートリーダーに置きます。

タスクマネージャーで「Read Now」を開き、プログラムを選択します。「OK」をクリックして測定を始めてください。最後に、録音を新しい実験ファイルとして保存し、データ解析用にします。