固相マイクロ抽出サンプリング:グラフト組織からのサンプル抽出のためのプローブベースの手法

臓器移植片の長期保存は、臓器機能と初期段階の臓器拒絶反応の指標である代謝プロファイルに影響を与えます。

これらの代謝産物を単離するには、生体適合性吸着剤でコーティングされた薄い固相マイクロ抽出または SPME プローブを採取することから始めます。プローブをハイドロアルコール洗浄液に浸して、コーティングされた吸着剤を水和し、結合した不純物を緩めます。

プローブをかき混ぜて不純物を取り除きます。次に、プローブを活性化溶液に入れ、再度撹拌します。活性化溶液中の化学物質はプローブ表面を改質し、吸着電位を高めます。プローブを水ですすぎ、滅菌して微生物汚染物質を除去します。

次に、組織マトリックスが吸着剤表面全体を覆うように、滅菌および活性化されたプローブを臓器移植片に挿入します。吸着剤はグラフトから遊離極性および非極性代謝産物を引き付け、その表面への吸着を可能にします。プローブを引っ込めて水ですすぎ、残留組織を取り除きます。

次に、プローブを脱着溶液に入れ、吸着した代謝産物と相互作用します。プローブを撹拌して、捕捉された代謝産物を分離し、脱着溶液に可溶化します。最後に、プローブを取り外し、得られた代謝産物混合物を処理して、その後の分析を行います。

まず、1対1のメタノールと水からなるプレコンディショニング混合物を準備します。1ミリリットルの溶液を各2ミリリットルのガラスバイアルにピペットで入れ、各バイアルに1つのプローブを入れます。ボルテックス撹拌機でバイアルを1,200rpmで1時間撹拌します。次に、プローブをLC-MSグレードの水ですすぎ、標準的な外科的滅菌プロトコルに従って、または無菌処理部門で滅菌します。

サンプルを抽出する準備ができたら、滅菌パッケージを開け、2つのプローブを腎皮質に直接挿入し、時点ごとに10分間、コーティングの全長が組織マトリックスで覆われていることを確認します。各プローブのサンプリング時間を必ず追跡してください。プローブを組織から引き抜いて引っ込め、すぐにコーティングをLC-MSグレードの水ですすぎ、残っている血液を取り除き、手術部位から必ず洗い流してください。

プローブを輸送するには、プローブを別々のバイアルに入れて閉じます。次に、ドライアイスまたは液体窒素を入れた箱にバイアルを入れます。サンプルを摂氏マイナス80度で保管するか、すぐに脱着を進めてください。

メタボロミクス分析用にアセトニトリルと水からなる脱着溶液と、リピドミクス分析用にイソプロパノールとメタノールからなる別の脱着溶液を調製します。100 マイクロリットルの溶液を 2 ミリリットルの標識バイアルのインサートに加え、各バイアルに 1 つのプローブを配置します。バイアルを1,200rpmで2時間撹拌します。次に、バイアルからプローブを取り出し、LC-MS 分析に進みます。